马晓茜

摘要：本文选用青海省海北藏族地区某奶牛养殖基地的腹泻病死牛为研究对象，取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏其进行大肠杆菌分离鉴定并进行药敏试验。结果显示，分离的菌株经过各个培养基的菌落形态、革兰氏染色显微镜镜检、生化试验结果可以确定为大肠杆菌;分离的大肠杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星、头孢曲松钠、庆大霉素药物敏感;对氨苄青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考药物中度敏感;对恩诺沙星、四环素、链霉素药物产生耐药。

关键词：海省海北藏族地区;牛;大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验

牛大肠杆菌病是一种急性的传染病，是由大肠杆菌引起的，临床上多表现为腹泻和败血症，在犊牛中的发病率最高，高达60%，死亡率达30%[1]。近几年随着肉牛和奶牛集约化养殖规模的迅猛发展，牛腹泻的发生率正在逐年攀升，发病原因也是越变越复杂[2]。青海省的草场面积占地3858万多公顷，是全省的土地面积约53%，所以该地区属于天然草场，草质优良，适合畜牧业的发展[3];海北藏族地区牛业养殖占了青海省60%以上[4];所以本研究选用青海省海北藏族地区患有腹泻的奶牛，对其进行大肠杆菌进行分离，然后并进行药敏试验，以期为青海省海北藏族地区牛业养殖过程引起牛腹泻的大肠杆菌提供治疗方案。

1材料与方法

1.1病料

选用青海省海北藏族地区某奶牛养殖基地的腹泻病死牛，进行解剖，取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏，用无菌自封袋保存，冷藏低温条件下带回实验室。

1.2试验需要的材料

试验需要的材料大肠杆菌培养基购于上海生工生物工程有限公司;微量生化鉴定管购于杭州天和微生物试剂有限公司，主要有糖类发酵试验管、吲哚试验管、甲基化试验管、V-P试验管、硫化氢试验管、柠檬酸盐利用试验管、尿素酶试验管;药敏片购于杭州驰成医药科技有限公司，主要有氨芐青霉素、恩诺沙星、阿米卡星、阿莫西林、左氧氟沙星、四环素、头孢曲松钠、卡那霉素、链霉素、阿奇霉素、庆大霉素、氟苯尼考。除需要以上材料外，还需要培养箱和显微镜。

1.3试验方法

1.3.1培养基配置

培养基的配置均按照说明书要求进行。

1.3.2细菌分离鉴定

解剖取回来的病料，取其干净面利用消毒好的划线接种棒蘸取上面的血水，划线接种于配置好的营养琼脂培养基上面，然后置于37℃恒温培养箱进行培养，24h后取上面的单个菌落划线接种于各种培养基中37℃培养24h，同时置于液体培养基中进行纯化培养;分离到的纯菌株接种微量生化鉴定管中进行生化试验，利用革兰氏染色液进行革兰氏染色。

1.3.3药敏试验

取纯化好的细菌菌液均匀涂布于营养琼脂平板上，然后在一个培养基上面贴上药敏片，一块平板贴6片药敏片，然后置于37℃的恒温培养箱进行恒温培养24h，然后用游标卡尺对抑菌圈大小进行测量。结果判定根据美国临床实验室标准化委员会推荐的判定标准执行。

2结果

2.1大肠杆菌分离鉴定结果

2.1.1菌落形态

在营养琼脂培养基上的菌落形态表面为光滑的灰白色;麦康凯培养基上面的菌落为深红色，表面光滑、扁平、整齐、光滑;SS琼脂培养基上的菌落为红色;伊红美蓝琼脂培养基上菌落带有紫黑色金属光泽、圆形、边缘整齐、表面光滑。

2.1.2革兰染色结果

通过显微镜镜检可以可看到红色短小、两端圆滑的弯曲杆菌。

2.1.3生化鉴定结果

结果参见表1。

2.2药敏试验结果

通过表2可以看出，分离的大肠杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星、头孢曲松钠、庆大霉素药物敏感;对氨苄青霉素、阿莫西林、卡那霉素、阿奇霉素、氟苯尼考药物中度敏感;对恩诺沙星、四环素、链霉素药物产生耐药。

3.讨论

通过本试验对治病菌进行分离鉴定，引起青海省海北藏族地区某奶牛养殖基地的腹泻牛死亡确定为大肠杆菌所致。本试选取了12种临床上用于治疗牛腹泻的药物，发现分离的大肠杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星、头孢曲松钠、庆大霉素药物敏感，库拉西·阿尔斯坦别克[5]对院阿勒泰地区某牛场2-6周龄腹泻犊牛进行大肠杆菌分离并进行药敏试验，药敏试验结果对左氧氟沙星、头孢曲松钠、庆大霉素高度敏，抑菌圈均在30mm以上，本研究分离的大肠杆菌对这三种药的敏感度和该研究的有差别，造成这个差别的原因可能地区不同和分离的菌株菌对这几种药物的敏感度不同有关，而且大肠杆菌血清型众多，而且不同血清型之间耐药性也不同[6]。最近因为抗生素的滥用严重，导致耐药性的产生，所以在预防该病上难度加难，所以对于基层牛场做好抗生素的使用筛选非常有必要[7]，这就要求对菌株进行药敏试验，然后合理用药。

参考文献：

[1]尚婷婷，袁张耀相袁林青袁等援犊牛大肠杆菌病病原的分离鉴定[J].援动物医学进展，2012，33，6：143-146.

[2]程慧芳，寇亚楠，陈雅君，等.牛源大肠杆菌0157院H7的分离鉴定及其生物学特性研究[J].中国人兽共患病学报，2014，30，10：1002-1008.

[3]郝彦龙，剡根强，王静梅，等.新疆北疆地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及部分生物学特性[J].中国兽医学报，2012，32（6）：848-851.

[4]丁生喜，张宏岩，刘晓平.青海省藏族地区畜牧业产业化发展[J].统计观察，2005，1：74-74.

[5]库拉西·阿尔斯坦别克.致犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定及药敏试验[J].试验研究，2018，33（5）：16-17.

[6]罗甜甜，王仲兵，雷宇平，等.山西省北部地区舍饲犊牛大肠杆茵病主要病原的分离和耐药性调查研究[J].中国动物检疫，2012，29（3）：42-44.

[7]别克木汗.木合木，库兰。巴合达吾列提，刘建明，等.规模化牛场犊牛腹泻的防治措施[J].新疆畜牧业，2018，33（6）：45.