牛 野，张 跃，原明月，袁子民

（辽宁中医药大学，辽宁 大连 116600）

朝鲜淫羊藿为淫羊藿多基原药材来源之一，其是小檗科植物朝鲜淫羊藿的干燥叶。由于不同基原淫羊藿所含成分的含量有所不同，2020 年版《中国药典》中，巫山淫羊藿由于所含朝藿定C 含量较高，已单独从淫羊藿药材基原中单独列出，只测定朝藿定C 含量；淫羊藿药材其他基原的朝鲜淫羊藿、淫羊藿（心叶）、柔毛淫羊藿与箭叶淫羊藿，均以总黄酮、总黄酮醇苷（朝藿定A、B、C 和淫羊藿苷）为含量测定指标，由于朝鲜淫羊藿中总黄酮醇苷含量低于其他基原品种，故2020 年版《中国药典》中对朝鲜淫羊藿总黄酮醇苷含量单独制订了限度标准[1-4]，但由于淫羊藿多基原药材均含有朝藿定A、B、C 和淫羊藿苷，因此，仅从多成分含量测定尚不能完全实现朝鲜淫羊藿的溯源及与其他基原淫羊藿的鉴别区分。课题组前期在对不同基原淫羊藿特征图谱的研究中发现，朝藿苷A 可作为朝鲜淫羊藿专属特征性成分，淫羊藿药材其他基原品种（巫山淫羊藿、淫羊藿、柔毛淫羊藿与箭叶淫羊藿）中均不含有该特征峰。因此，本文对辽宁省不同产区的朝鲜淫羊藿中朝藿苷A 的含量进行测定，为其药材质量标准提升的专属性研究提供实验依据。

1 材料

1.1 仪器 Agilent-110 0 型高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；DFT-50 型高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；UV-301 0 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；SG-330 0 HDT 超声波清洗机（上海冠特超声仪器有限公司）；FAA100 4 型精密电子天平（天津天马衡基仪器有限公司）。

1.2 试药 朝藿苷A 对照品（实验室自制，经HPLC面积归一化法测定含量＞98%）；辽宁省不同产区朝鲜淫羊藿药材于2020 年6 月采收，其他不同基原的淫羊藿为市售，均经辽宁中医药大学中药资源教研室尹海波鉴定为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornuMaxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum（Sieb.et Zucc.）Maxim.、柔 毛 淫 羊 藿Epimedium pubescensMaxim.、朝鲜淫羊藿Epimedium koreanumNakai、巫山淫羊藿Epimedium wushanenseT.S.Ying的干燥叶；磷酸、甲醇为色谱纯，水为市售纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.1%磷酸溶液-甲醇（45:55）为流动相；流速为1.0 mL/min；柱温为35 ℃；测定波长为270 nm；进样体积为10 μL。

2.2 供试品的溶液 将不同基原淫羊藿药材粉碎后过三号筛，各精密称取0.2 g，分别置具塞三角瓶中，分别精密加入25 mL 的70%乙醇，称重，超声30 min，放冷，称重补足失重，摇匀，高速离心，取续滤液[5]，即得不同基原淫羊藿供试品。

2.3 对照品的溶液 取适量的朝藿苷A 对照品，溶于甲醇，摇匀，制成浓度为61.7 μg/mL 的对照品溶液。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1、2.5、5、10、15、20 μL，按2.1 项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，经线性回归，得标准曲线的方程为：Y=1 210.8X-24.58，朝藿苷A 在0.061 7～1.234 μg 范围内，呈良好的线性关系（r=0.999 6）。

2.5 专属性试验 分别称取其他基原淫羊藿（淫羊藿、巫山淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿）药材粉末，按2.3 项下的供试品溶液制备方法，同法制成其他不同基原淫羊藿供试品溶液，按2.1 项下色谱条件，依法测定，结果在朝藿苷相同保留时间处无相应色谱峰，表明朝藿苷A 可作为朝鲜淫羊藿的专属特征性成分。色谱图见图1。

图1 对照品及各基原淫羊藿供试品HPLC 色谱图

2.6 加样回收率试验 平行称定6 份0.1 g 已知含量为0.348%的药材粉末，分别精密加入朝藿苷A 对照品溶液（浓度为61.7 μg/mL）6.0 mL 和70% 乙醇19.0 mL，按2.3 项下方法制备6 份供试品溶液。按2.1项下测定，结果回收率在97.2%～99.8%，RSD为1.0%，符合测定要求。

2.7 重复性试验 分别取朝鲜淫羊藿粉末，平行配制6 份供试品溶液，测定朝藿苷A 的含量。结果平均含量为0.346%，RSD为1.29%，表明重复性良好。

2.8 精密度试验 取同一供试品溶液，按2.1 中的色谱条件，分别进样6 次，每次10 μL，测定朝藿苷A峰面积，计算该峰面积的RSD为1.15%，符合相关规定。

2.9 稳定性试验 取供试品溶液，分别在不同时间（0，2，4，6，8，10 h）进样10 μL，依法测定，记录朝藿苷A 峰面积，RSD为1.93%，表明供试品溶液在10 h内有良好的稳定性。

2.10 样品含量测定 取辽宁不同产区的朝鲜淫羊藿的药材粉末，按2.2 项下方法制备4 份供试品溶液，依法测定，采用外标一点法计算朝藿苷A 的含量，结果见表1。

表1 朝藿苷A 含量测定结果（n =3） %

3 讨论

3.1 特征性成分的确定 朝鲜淫羊藿主要分布于东北三省，吉林和辽宁产量较多，多为野生资源，且不同产地朝鲜淫羊藿药材参差不齐[6-8]，现有研究对朝鲜淫羊藿的含量测定无法满足其专属性和特征性的要求。课题前期研究发现朝鲜淫羊藿含有两个专属特征性成分，能明显区分于其他基原淫羊藿（巫山淫羊藿、箭叶淫羊藿、淫羊藿、柔毛淫羊藿），经对其专属特征性成分分离、纯化、结构鉴定与现有文献比对确定为朝藿苷A 和朝藿苷B[9-10]，目前对二者的含量测定研究尚未见报道。由于朝藿苷B 含量较低，为了使得该实验有显著性的意义，故本文只对含量较高的朝藿苷A进行了含量测定。

3.2 检测波长的确定 在对朝藿苷A 检测波长的筛选中，通过参考文献后[11]，在200～400 nm 将朝藿苷A的对照品溶液扫描测定，结果其分别在205、270、314、350 nm 波长处均有吸收，但270 nm 波长处有较强吸收，且色谱图中未其他杂质峰的干扰，故选择270 nm 为检测波长。

3.3 流动相的选择 本研究中在对流动相筛选曾参考文献报道中朝鲜淫羊藿中朝藿甙甲与朝藿甙乙的制备分离时采用的流动相甲醇-水（64:36）的等度洗脱条件[12]，但由于朝藿苷A 和朝藿苷B 为同分异构体，极性相近，该流动相无法将二者分离，为了使色谱峰达到较好的分离，本研究经过对流动相的筛选，最终采用甲醇-0.1%磷酸溶液（55:45）作为流动相。

3.4 含量比较 本文通过HPLC 法测定朝鲜淫羊藿中朝藿苷A 的含量初步得出结论，不同产地朝藿苷A 含量有所差异，本溪桓仁含量最高，丹东宽甸的含量最低，为了使得结果更加具有代表性，对其含量的测定研究将在后续工作中继续进行。