刘倩 杨菁

哺乳动物的妊娠是一个独特、动态的免疫过程。妊娠期母体能忍受异体胎儿在体内的生长，免疫耐受异常则可导致自然流产的发生，但母胎免疫调控的机制目前仍不明确。Fyn为非受体酪氨酸激酶SRC家族中的一员，参与调控各类免疫活动，尤其是T淋巴细胞的发育和功能，与多种自身免疫性疾病和移植排斥相关[1, 2]。虽然Fyn对辅助性T细胞(T helper cells, Th cells)Th1和Th2的发育无明显影响，但可能通过干扰素调节因子4(interferon regulatory factor 4, IRF4)调控Th17细胞的增殖分化[3]。Th17细胞作为母胎免疫中的关键性元素，与自然流产的发病密切相关。我们的前期研究发现，IRF4可通过视黄酸相关的孤儿受体γt(RAR-related orphan receptor Gamma T, RORγt)调控Th17细胞的分化和功能，进而影响母胎免疫[4]。但是，Fyn在母胎界面的表达及作用仍然未知。因此，本研究拟探讨Fyn在母胎界面的表达特点及其对Th17细胞和相关炎症因子的调控作用，为进一步阐明流产发生的原因和母胎耐受的调控机制，以及寻找新的防治手段提供创新性的理论依据。

材料与方法

一、材料

1. 实验动物：雌性和雄性BALB/C小鼠，SPF级，8～10周，购于武汉大学动物中心(动物合格证号：SCXK(鄂)2008-0004)。雌性CBA、雄性DBA/2小鼠，SPF级，8～10周，购于南京大学生物医药研究所(动物合格证号：SCXK(苏)2010-0001)。相关动物操作已通过武汉大学伦理学委员会批准。

2. 主要试剂：RNA抽提试剂Trizol(美国invitrogen公司)、RNA逆转录试剂盒及实时荧光定量PCR检测试剂盒(日本takara公司)、Fyn多克隆抗体和GAPDH单克隆抗体(美国CST公司)、鼠通用型免疫组化试剂盒(丹麦Dako Denmark A/S公司)、小鼠Fyn单克隆抗体(美国Santa Cruz生物公司)、IRDye 800CW标记的羊抗兔IgG(美国LI-COR Biosciences公司)、流式检测试剂盒(美国eBioscience公司)、Fyn活性抑制剂SU6656和细菌脂多糖LPS(美国sigma公司)。……