张风卫 王珊珊 周红娟 商学钗 蔡龙

浙江大学医学院附属杭州市胸科医院临床医学检验实验中心 310003

近年来， 流感病毒跨物种感染成为流感防疫工作面临的新挑战，对人类健康造成重大影响[1-2]。接种疫苗是目前预防流感发生与传播的最有效方法，但由于流感病毒表面蛋白易发生抗原漂移、重配，变异的流感病毒极易逃避免疫系统记忆，导致疫苗失效[3]，因此研制一种能够应对流感病毒快速变异的广谱疫苗迫在眉睫。 近年来，以M2 蛋白为基础的广谱疫苗逐渐成为研究的热点[4-8]。M2 蛋白在所有A 型流感病毒中非常保守， 可诱导产生CTL，在反应中具有交叉保护能力，其作为流感广谱疫苗的成分进行研究具有潜在的意义和应用前景。 本研究拟利用基因工程技术，将禽流感H7N9流感病毒特异性抗原M2 蛋白作为基础蛋白，与高致病性禽流感H5N1 亚型膜蛋白HA 共表达，制备一种新型流感相关病毒样颗粒（VLPs），为广谱疫苗研究提供参考。

材料与方法

一、材料

昆虫细胞Sf9 及培养基、大肠埃希菌DH10Bac、转移载体 pFastDual、 杆粒转染试剂 Cellfectin ⅡReagent 和转染试剂 LipofectamineTM2000 购自Invitrogen 公司； 含 H5N1 的 HA 编码序列的质粒pVRC-H5N1 HA 由浙江大学医学院附属杭州市胸科医院临床医学检验实验中心保存； 含H7N9 M2基因的A 型流感病毒H7N9 M2 质粒购自北京义翘神州科技有限公司；DNA Ligation Kit Ver.2.1， 限制性 内 切 酶 EcoR Ⅰ 、Hind Ⅲ 、Kpn Ⅰ 、Xho Ⅰ 购 自TAKARA 公司； 质粒提取试剂盒购自TIANGEN 公司； 杆粒提取试剂盒购自碧云天公司； 引物由Invitrogen 公司合成。

二、研究方法

1.重组穿梭载体的构建

重组穿梭载体pFastBac Dual-H5N1 HA 的构建：设计引物，引……