佘永红，杨德泉

湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南 吉首 416000

生姜为姜科植物姜Zingiber officinaleRosc.的新鲜根茎。生姜味辛，微温，归肺、脾、胃经。生品解表散寒的功效较强，煨制后缓而性降，增强温中止呕、和胃降逆的作用，明·李时珍《本草纲目》［1］：“生用发散，熟用和中”。煨姜具有温中止呕、驱寒止痛功效，适于胃寒呕吐及胃腹冷痛、泄泻等症，是临床辨证施治常用品种，也是脾胃科的常用中药饮片。临床研究证实［2］，煨姜汤方剂能够减轻化疗导致的消化道不良反应，不影响肿瘤对化疗的反应，提高患者的生活质量；煨姜还应用于治疗胃息肉切除术后出现的反复胃脘受风寒则易腹痛而泻；老年患者肠癌术后又做化疗，致肠胃受损，脾运失健，气津两伤；受凉后易反酸嗳气，呃逆频频等方面［3］。含煨姜成分的逍遥丸（散），用于治疗抑郁症、眼科疾病、精神疾病、神经衰弱、黄褐斑、青春期女生月经不调及其他妇科疾病、消化系统疾病等方面［4-13］。煨姜之性既不及生姜之太散，又无干姜之过燥，故略兼二者之长，善“治胃寒，泄泻，吞酸”（《会约医镜》）［14］。罗婷等用HPLC 测定6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚的含量，结果显示生姜炮制过后的煨姜中这三个成分的含量均低于生姜［15］，说明煨姜的成分分布和含量水平与临床应用疗效直接相关。

生姜及其炮制品干姜、炮姜、姜炭均在《中国药典》2020年版一部中收载，而煨姜未被收载。有关煨姜的各省炮制规范，只有山东省单列煨姜，另外云南、广西、甘肃、湖南、重庆、上海、江西、贵州、江苏、河南各省炮制规范在生姜项下附煨姜［16］，且以上各省炮制规范标准中均无煨姜的含量测定。《湖南省中药饮片炮制规范（2010年版）》煨姜列在生姜项下［17］，为完善和提升煨姜的质量标准，确保煨姜的质量，采用HPLC 法研究测定煨姜中活性成分6-姜辣素的含量，为定量控制煨姜饮片的质量提供有效手段。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 高效液相色谱仪（检测器：VWD）；岛津电子天平AUW220D；ZOOMWO Water Environmental超纯水机；KM5200D 中文液晶超声波清洗器（功率200 W，40 kHz）；XMTD-4000 电热恒温水浴锅。

1.2 试药

6-姜辣素对照品（中国食品药品检定研究院，含量测定用，批号：111833-2020007，纯度：99.3%）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯净水；其他试药均为分析纯。

1.3 样品

煨姜饮片9 批（湖南振兴中药有限公司，批号：19092909-1、19092909-2、19092909-3；湖南衡岳中药饮片有限公司，批号：19112418-1、19112418-2、19112418-3、20210522-1、20210522-2、20210522-3）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-甲醇-水（40∶5∶55）；流速1.0 mL/min；检测波长为280 nm；柱温30 ℃。

2.2 对照品溶液的制备

取6-姜辣素对照品，分别精密称定112.35 mg、108.48 mg，置50 mL 棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液（2.231 3 mg/mL，2.154 4 mg/mL）。精密吸取对照品储备液各1 mL，置20 mL 容量瓶中，分别加甲醇稀释成浓度为0.111 56 mg/mL、0.107 72 mg/mL 的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 系统适用性试验

分别精密吸取对照品溶液8 μL 与供试品溶液20 μL，按上述色谱条件进样，6-姜辣素分离度大于1.5，理论板数均在18 000 以上。供试品色谱中，在与对照品色谱峰相应的位置上检出色谱峰且空白溶液无干扰。见图1～3。

图1 6-姜辣素对照品色谱图

2.5 线性关系考察

图2 煨姜样品色谱图

图3 空白溶液色谱图

精密吸取浓度为2.231 3 mg/mL 的对照品储备液适量，依次加甲醇稀释成浓度为5.578 2、11.156 4、22.312 7、33.469 1、55.781 8、111.563 6、223.127 1 μg/mL 的对照品溶液，精密吸取上述对照品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积Y 值为纵坐标，浓度X（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：Y=11.088X-1.359 5，r=1.000 0。结果表明：6-姜辣素对照品在5.578 2～223.127 1 μg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一煨姜供试品溶液（批号19092909-2，湖南振兴中药有限公司），连续进样6 次，每次20 μL，记录色谱峰面积，计算RSD（n=6）为0.85%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一煨姜供试品溶液（批号19092909-2，湖南振兴中药有限公司），分别于配制后的0、3、12、18、24 h，精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，测定，煨姜的RSD（n=5）为0.67%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

2.8 重复性试验

取同一煨姜供试品溶液（批号19092909-2，湖南振兴中药有限公司），依法制备6 份供试品溶液，测定并计算，含量分别为4.159 6、4.178 5、4.212 0、4.102 5、4.114 3、4.102 0 mg/g，平均含量为4.144 8 mg/g，RSD 为1.2%，表明该方法重复性良好。

2.9 耐用性试验

采用拟定的方法，使用不同的液相色谱仪、两个不同的色谱柱对同一批样品进行测定。（1）仪器：Agilent 1260 Infinity，检测器VWD；色谱柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm×5 µm），型号：880975-902，Agilent 公司。（2）仪器：Agilent 1260 Infinity Ⅱ，检测器 DAD；色谱柱：Acclaim ™ Polar Advantage II C18（250 mm×4.6 mm×5 µm），型号：JADE-PAK，Thermo 公司。平行测定同一生产企业的3 份样品，结果3 份样品6-姜辣素含量分别为：（1）0.36%、0.42%、0.36%；（2）0.36%、0.43%、0.36%。（1）与（2）测定的3 份含量结果之间的RSD 分别为0、1.7%，0。结果表明，本方法耐用性良好。

2.10 含量测定方法比较实验

将煨姜样品按《中国药典》2020年版一部炮姜含量测定项下供试品溶液的制备方法［18］，制备煨姜供试品溶液：取本品粉末（过三号筛）约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，称定重量，超声处理（功率100 W，40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

按上述方法制备得到的供试品溶液，按“2.1”色谱条件实验，分别精密吸取对照品溶液8 μL 与供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定结果见表1。

表1 按炮姜6-姜辣素含量项下制备煨姜供试品溶液测定结果

结果表明，用炮姜含量测定项下的制备供试品溶液方法，制备煨姜供试品溶液，所测得的含量，与本研究煨姜含量测定方法测定的含量基本一致。本研究含量测定方法准确、稳定。

2.11 回收率试验

取已测定含量的同一煨姜供试品（批号19092909-2，湖南振兴中药有限公司）（含6-姜辣素4.144 8 mg/g）约0.4 g（9 份），精密称定，按干燥品计算（水分为12.52%）置锥形瓶中，按80%、100%和120%的水平用刻度吸管精密加入浓度为2.231 3 mg/mL 的6-姜辣素对照品适量（见表2），依法制备供试品溶液，测定并计算结果，平均加样回收率为99.4%。

表2 加样回收率试验结果表

2.12 样品含量测定结果

对企业提供的9 批生姜煨姜样品进行了含量测定，按“2.3”项方法制备供试品溶液，分别按外标两点法计算，结果见表3。

表3 煨姜6-姜辣素含量测定结果

3 讨论

3.1 提取方法的选择

比较加热回流提取和超声提取的方法，因加热回流提取比超声提取的滤过速度要快，故选择加热回流提取。

3.2 对煨姜炮制工艺的建议

《湖南省中药饮片炮制规范》（2010年版）煨姜炮制：“取生姜块，用草纸包裹湿润后，照煨制法（附录Ⅰ）煨至纸变焦黄色”。批号为19092909-1、19092909-2、19092909-3 的煨姜采用传统草纸包裹，直接在麦麸火堆煨制，操作过程中产生烟雾，对环境产生污染。本研究对煨姜的总灰分进行了检测，结果用传统草纸包裹煨制的煨姜总灰分的平均值为7.50%，采用烤箱煨制的煨姜总灰分为3.55%，显示烤箱煨制方法更加洁净。另外，传统草纸包裹煨制方法，在夏天还存在炮制人员难以操作、火候不易控制、产品易焦化等缺点。因此，建议煨姜标准增加麦麸烘箱煨姜方法，以满足工业化生产需要。

本次研究参照《中国药典》2020年版一部中生姜饮片含量测定的色谱条件［18］，测定煨姜中活性成分6-姜辣素的含量，所建立的煨姜6-姜辣素的含量测定方法，快速，准确，高效，灵敏，为煨姜的质量控制提供了有效的检测手段。