李晶梅，陈鲁杰，王焕君，李 改，朱 薇，张飞雁，石宝兰，漆世华，谢红玲

(1.国药集团动物保健股份有限公司，武汉 430075；2.诺华生物科技(武汉)有限责任公司，武汉 430075)

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病,其中的H5N1亚型禽流感是危害最大的禽类疫病之一。疫苗能有效防控该疫病，现阶段主要应用的是鸡胚工艺或细胞培养工艺制备H5N1亚型禽流感病毒，进而生产全病毒灭活疫苗。全病毒灭活疫苗需在生物安全三级的生产车间生产，生产成本较高，因此广大研究者一直在探寻新型疫苗研发方向[1]。

昆虫杆状病毒表达系统是一种能够高效表达外源基因的真核表达载体系统[2]。昆虫杆状病毒不感染脊椎动物，无生物安全隐患；基因组较大可容纳大片段外源基因；能对表达的蛋白进行加工修饰，使表达的蛋白保存原有的生物活性[3]。有研究表明该系统表达流感病毒的 HA、NA、M1 蛋白可自我包装成形态类似于禽流感病毒的病毒样颗粒(Virus-like particles，VLPs)[4]。VLPs具有较好的免疫原性，有开发成为疫苗产品的可能。

为研究基于该系统构建的含有H5N1亚型禽流感HA、NA、M1基因的重组杆状病毒(简称“VLP01株”)，其表达产物是VLPs，还是游离的HA、NA、M1等蛋白，对表达产物进行了血凝、电镜、Western Blot、ELISA鉴定，以确定其性质。

1 材料和方法

1.1 毒种、细胞 VLP01株毒种由诺华生物科技(武汉)有限责任公司提供，国药集团动物保健股份有限公司扩繁并保存；Sf9细胞由国药集团动物保健股份有限公司扩繁并保存。

1.2 主要试剂 H5N1 HA重组蛋白、H5N1 NA重组蛋白、H7N9 M1重组蛋白，Sino Biological公司产品；……