张 敏，孔冬妮，李 建，于义娟，黄 涛，王碧群，石宝兰，朱 薇，郑良益，李婷婷，谢红玲*

(1.国药集团动物保健股份有限公司，武汉430075；2.中国兽医药品监察所，北京100081)

猪δ 冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是一种引起猪腹泻的重要传染病原，对养猪业造成了巨大经济损失，是当前猪病防控的重大难题。PDCoV于2012年首次被报道，由Woo 等通过流行病学调查在动物粪便中成功检测到[1]。目前在我国猪病料中也检出PDCoV，由该病流行趋势推测近年在我国爆发的可能性是存在的[2]。PDCoV感染后猪出现厌食、呕吐、严重腹泻和脱水等临床症状，与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus, TGEV)及猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等感染十分类似，给临床诊断带来极大困难，因此急需研究开发高效、准确、快速的抗原诊断方法[3-4]。胶体金免疫层析技术具有简单、快速、灵敏、可现场操作等优点，目前已经被广泛应用。本研究旨在研制PDCoV的免疫胶体金试纸条，实现临床PDCoV的快速准确检测，为猪腹泻病防控奠定坚实基础。

PDCoV为单股正链RNA病毒，含9个开放阅读框(open reading frame，ORF)，基因共编码4个结构蛋白，分别为棘突蛋白S (spike)、囊膜蛋白E (envelope)、膜蛋白M (membrane)和核衣壳蛋白N (nucleocapsid)[5]。其中N蛋白是一种磷酸化的多功能结构蛋白，保守性强，在感染早期的病猪血清中可检测到高水平的N蛋白抗体[6-7]，因此可将N蛋白作为PDCoV感染早期血清学诊断的靶标蛋白。本实验构建表达和纯化了有生物活性的PDCoV N蛋白，以其作为免疫原免疫小鼠，制备其单克隆抗体(Monoclonal antibodyies, McAbs)，同时应用胶体金免疫层析技术，成功建立PDCoV免疫胶体金试纸条快速检测方法，助力PDCoV的临床诊断及流行病学调查。……