何昭华，梁文旺，钟茜

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是导致成年人视力丧失的主要原因之一，而高血糖被认为是DR 的主要致病因素，并与视网膜微血管内皮细胞凋亡、氧化应激增加有关[1]。白杨素（chrysin）是一种天然的黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤特性，其对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用[2]。白杨素与黄芩苷联用对肾小管损伤、肾功能紊乱具有改善作用[3]。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNAs）是长度超过200 nt、蛋白编码潜力缺失的RNA 转录本，因其在细胞增殖、凋亡、氧化应激损伤等生物学过程中的作用而受到广泛关注。研究显示[4]，上调lncRNA 生长抑制特异性转录本5（growth suppression-specific transcript 5，GAS5）表达可改善脂多糖诱导的软骨损伤。DR患者外周血中lncRNA GAS5 表达降低[5]，但白杨素是否调控lncRNA GAS5 表达保护视网膜微血管内皮细胞损伤并不清楚。本研究以高糖刺激人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells，HRMECs）构建细胞损伤模型，探讨白杨素对该损伤是否具有保护作用，分析其机制是否与调控lncRNA GAS5 表达有关，以期为DR 治疗提供有效策略。

1 材料与方法

1.1 实验材料

HRMECs 细胞购于上海启达生物科技公司；白杨素（纯度≥98%，规格20 mg）购于上海源叶生物科技公司；GAS5小干扰RNA（si-GAS5）及其阴性对照（si-NC）、GAS5 过表达质粒（pcDNA-GAS5）与其空载体质粒（pcDNA）购于北京华大六合基因公司；脂质体2000（Lipofectamine 2000）购于美国Invitrogen公司；逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq II 试剂盒购于上海生工生物公司；丙二醛（MDA）含量检测试剂盒、超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检测试剂盒、膜联蛋白V（annexin V）-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）凋亡检测试剂盒购于北京索莱宝科技公司；细胞计数试剂盒（CCK-8）购于上海贝博生物公司；……