刘嘉琳，刘东旭，董文龙，李国江*

(1．吉林农业大学 动物科学技术学院， 吉林 长春 130118； 2．吉林农业科技学院 动物科技学院， 吉林 吉林市 132109； 3．吉林省预防兽医学重点实验室， 吉林 吉林市 132109)

猪腹泻病是导致仔猪死亡的主要原因之一，严重影响了饲料报酬，制约养猪业的健康发展。其中大肠杆菌、沙门菌和产气荚膜梭菌是引起猪细菌性腹泻病的主要病原。大肠杆菌某些致病血清型菌株可致仔猪黄白痢、猪水肿病，临床上以肠炎、肠毒血症为特征[1-3]；沙门菌主要感染1～4月龄猪，猪沙门菌病又名猪副伤寒,临床上分为急性、亚急性和慢性型，急性型以败血症为特征，亚急性和慢性型以坏死性肠炎为特征；产气荚膜梭菌亦称魏氏梭菌，引起仔猪坏死性肠炎，以肠道出血为特征，表现为红色下痢。猪细菌性腹泻一年四季都有可能发生，既可单一感染，也可相互混合感染。因此，本试验针对大肠杆菌irp2基因[4]、沙门菌fimY基因[5]、产气荚膜梭菌plc基因[6]设计特异性引物和探针并优化反应条件，建立了同时检测并区分这3种细菌的多重实时荧光定量PCR检测方法，为这3种细菌的检测提供了有效手段。

1 材料与方法

1.1 菌株及临床样品的采集多动物链球菌、猪链球菌、乳酸乳球菌、金黄色葡萄球菌、海氏肠球菌、绿色气球菌、多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯菌、鼠伤寒沙门菌、洛菲不动杆菌、溶血曼氏杆菌、HPI+大肠杆菌、大肠杆菌标准株ATCC25922、产气荚膜梭菌等由实验室保存。猪粪便样本采集于吉林地区猪场表现出腹泻症状的猪，称取100 mg置于灭菌离心管中保存于-80℃超低温冰箱。……