黄小华

（新余钢铁集团有限公司中心医院检验科，江西 新余 338000）

急性白血病（Acute leukemia，AL）和骨髓异常增生综合征（Myelodysplastic symdrome，MDS）是造血干细胞或祖细胞异常引起的血液系统恶性肿瘤，患者早期常缺乏特异性症状体征，容易发生漏诊或误诊而延误治疗时机，因此积极探寻AL和MDS特异性血清标记物，提升早期诊断和鉴别水平对改善患者预后具有重要意义[1]。

研究显示乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）、铁蛋白（Serum ferritin，SF）以及血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）表达水平在恶性肿瘤或血液系统疾病中均存在明显异常，但对AL和MDS鉴别诊断是否具有参考价值尚未见相关报道[2-4]。

本文通过分析血清LDH、SF及TPO表达水平对AL和MDS患者鉴别诊断价值，为促进AL和MDS诊治水平不断进步提供循证医学证据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年9月至2018年9月我院AL患者71例和MDS患者52例进行横断面研究，其中AL组男女比42/29，年龄16～71岁，平均年龄45.83±8.92岁；MDS组男女比28/24例，年龄23～74岁，平均年龄46.71±9.47岁，两组临床基本资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。

AL诊断标准：患者表现为急骤高热，全身酸痛或进行性贫血等症状、体征；实验室检查显示血象出现原始细胞或幼稚细胞，骨髓象显示全部有核细胞中有核红细胞占比<50%，且原始细胞占比≥20%[5]。

MDS诊断标准：患者表现为进行性贫血，可伴发热或出血；实验室检查显示1～2系或全血细胞减少，可见巨大红细胞等病态造血现象，骨髓象显示至少1系血细胞异常造血；同时排除其它病态造血相关病变[6]。

纳入标准：符合AL与MDS相关诊断标准；经骨髓细胞形态及免疫分型等辅助检查确诊；患者及家属知晓本研究并签署同意书；患者临床资料保存完整。

排除标准：合并严重感染或器质性疾病；合并其它恶性肿瘤；合并其它血小板减少性疾病。

1.2 方法

1.2.1 基本信息收集

患者入院后详细询问性别、年龄、病程和既往史等基本资料，同时完善体格检查，测量身高、体征、心率和血压等一般指标。

1.2.2 骨髓穿刺

嘱患者取侧卧位，选择髂前上棘为穿刺部位，常规消毒铺巾后以1%利多卡因（上海朝晖药业有限公司，国药准字H31021073）进行浸润性麻醉后将穿刺针固定在适当长度，左手拇指和食指固定皮肤，右手持针垂直于骨面刺入，接触骨质后采用左右旋转的方法缓慢刺入，至产生突破感时吸取骨髓0.1～0.2 mL，抽出穿刺针并局部加压包扎，观察30 min无明显不良反应时送回病房，将骨髓涂片、染色并于光学显微镜下，进行观察和判断。

1.2.3 血清LDH、SF检测

取外周静脉血3 mL，以3000 rpm离心10 min后取上清，采用罗氏Cobas c311全自动生化仪（德国罗氏公司）检测LDH表达水平，试剂盒购自北京九强生物技术股份有限公司。

另将3 mL血液样本以1500 rpm离心10 min后取上清，采用免疫比浊法检测SF表达水平，所用仪器为罗氏Cobas c311全自动生化仪及配套试剂盒。

1.2.4 TPO测定

取外周静脉血3 mL于EP管中，以1000 rpm室温离心10 min，取上清-80℃保存备用。

检测前根据试剂盒（美国RD公司）提供的稀释标准图表将原倍标准品稀释5倍并设置样品孔、标准孔和空白孔，向样品孔加入待测血清10 μL+稀释液40 μL，标准孔加入稀释后的标准品50 μL，空白孔不添加任何试剂，覆膜后于37℃环境孵育30 min，采用洗涤液洗涤5次，每次30 s，然后向样品孔和标准孔分别加入酶标试剂50 μL，37℃温育30 min后采用洗涤液洗涤5次，每次30 s，拍干后样品孔和标准孔分别加入显色液A和B试剂各50 μL并于37℃环境避光孵育15 min，待反应完成并分别加入终止液于37℃环境孵育30 min，采用Multiskan FC酶标仪（上海赛默飞世尔仪器有限公司）测量各孔450 nm处吸光光度值（OD），根据标准曲线计算TPO浓度。

1.3 统计学方法

所有数据分析采用统计学软件SPSS19.0，计量资料以均数±标准差（SSD）作表示，进行独立样本t检验；采用多因素Logistics回归分析研究LDH、SF和TPO与AL和MDS的关系，作受试者工作特征（Rceiver operating characteristic，ROC）曲线并计算曲线下面积（Area under curve，AUC）分析血清LDH、SF和TPO单独及联合应用对AL和MDS鉴别诊断价值，以P<0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 AL和MDS患者血清LDH、SF及TPO水平比较

AL组血清LDH及TPO水平均明显高于MDS组，血清SF水平明显低于MDS组（P<0.05），见表1。

表1 患者血清LDH、SF及TPO水平较（±SD）

表1 患者血清LDH、SF及TPO水平较（±SD）

注：与AL组相比，*P<0.05。

分组 n LDH（U·L-1） SF（ng·mL-1） TPO（pg·mL-1） AL组 71 647.32±231.49 713.54±209.86 976.35±354.28 MDS组 52 526.87±194.06* 1035.82±368.41* 481.27±162.43*

2.2 血清LDH、SF及TPO水平与AL和MDS的关系分析

以疾病分类为因变量（AL=1，MDS=0），纳入LDH、SF和TPO进行多因素logistics回归分析。

结果显示血清LDH、SF和TPO水平与AL均存在密切联系（P<0.05），相关参数见表2。

表2 血清LDH、SF及TPO水平与AL和MDS的关系分析

2.3 LDH、SF和TPO对AL和MDS鉴别诊断价值分析

ROC曲线分析显示，LDH、SF及TPO对AL和MDS鉴别诊断AUC分别为0.684、0.814、0.922和0.963，Youden指数分别为0.308、0.530、0.777和0.877，且LDH、SF及TPO联合进行鉴别诊断的AUC高于三项指标单独诊断，见图1。

图1 LDH、SF及TPO单独及联合鉴别AL和MDS的ROC曲线

3 讨论

LDH是参与无氧糖酵解和糖异生的酶系，由PI3K/Akt/TORC1信号通路调控，在AL及MDS等血液系统恶性肿瘤中可出现不同程度升高[2]。本研究结果显示AL患者明显高于MDS，且ROC曲线分析显示LDH鉴别AL和MDS的AUC为0.684，提示LDH对两种疾病鉴别诊断具有重要参考价值。SF是由去铁蛋白和Fe3+组成的可溶性蛋白质复合物，当机体缺铁时表达水平可明显升高，对贫血性疾病的诊断具有重要意义[3]。 本研究中AL和MDS患者血清SF表达水平均高于正常人群（SF正常值参考范围男性<322 ng•mL-1，女性<219 ng•mL-1）且二者之间存在明显差异；ROC曲线分析结果显示，SF用于AL和MDS鉴别诊断的AUC为0.814。

目前临床对TPO表达的调控机制尚未完全明确，推测与血小板及巨核细胞（骨髓中一种从造血干细胞分化而来的细胞）膜表面TPO受体数量的负反馈调节有关，当血小板及巨核细胞减少时TPO表达水平可明显升高，因此血清TPO在各种血小板减少性疾病中可出现不同程度表达异常[4]。

本研究结果显示AL和MDS患者血清TPO水平明显升高且AL明显高于MDS患者，用于AL和MDS鉴别诊断的AUC达0.922。此外本研究采用血清LDH、SF和TPO水平进行联合诊断显示灵敏度为95.77%，特异度为92.31%，准确率为94.31%，Kappa值为0.883，较三项指标单独鉴别时准确性均明显提升，因此联合应用血清LDH、SF和TPO可为准确鉴别AL和MDS提供参考，有利于减少骨髓穿刺等有创操作。

Structure, function and pharmacology of human itch GPCRs

Can Cao, et al.

The MRGPRX family of receptors (MRGPRX1-4) is a family of mas-related G-protein-coupled receptors that have evolved relatively recently1. Of these, MRGPRX2and MRGPRX4 are key physiological and pathological mediators of itch and related mast cell-mediated hypersensitivity reactions2-5. MRGPRX2 couples to both Giand Gqin mast cells6. Here we describe agoniststabilized structures of MRGPRX2 coupled to Gi1and Gqin ternary complexes with the endogenous peptide cortistatin-14 and with a synthetic agonist probe, respectively, and the development of potent antagonist probes for MRGPRX2. We also describe a specific MRGPRX4 agonist and the structure of this agonist in a complex with MRGPRX4 and Gq. Together, these findings should accelerate the structure-guided discovery of therapeutic agents for pain, itch and mast cell-mediated hypersensitivity.

Nature. 2021 Nov 17. doi: 10.1038/s41586-021-04126-6.