张隆业 刘维萍 张彦芬 郭永力 管仁苹 邵雪 王兆宇 李灿

(1.秦皇岛市第一医院肾脏内科，河北 秦皇岛 066000；2.秦皇岛市第一医院药学部，河北 秦皇岛 066000；3.延边大学附属医院肾脏内科，吉林 延吉 133000)

他克莫司(tacrolimus, TAC)是一种广泛使用的维持性免疫抑制剂，但长期使用会引起相当大的肾毒性[1-4]。TAC造成不可逆的肾损伤与小动脉透明变性和增厚，血管收缩和缺血，间质纤维化，细胞凋亡和萎缩[5-6]。TAC诱导的肾毒性的发病机制仍不清楚，其分子机制可能与细胞凋亡、氧化应激、炎性介质等多种因素直接相关，往往各种机制间相互刺激相互协调，共同导致了肾毒性的发生[7-9]。胰激肽原酶(pancreatic kallikrein，PK)属于激肽释放酶-激肽系统类物质，在人体多个部位具有较强的表达能力，与血管中的活性物质相遇后会产生作用效应，对肾脏功能具有一定的调节作用。临床中使用的胰激肽原酶对慢性肾脏病具有良好的治疗效果，对糖尿病肾病、药物相关肾损伤以及肾病综合征均有保护作用。但对TAC诱导的肾损伤无明确作用，分子机制也无具体研究[10-11]。本课题通过对TAC诱导的肾小管上皮细胞来研究PK对其保护作用及相关机制。

1 材料与方法

1.1 HK-2细胞培养及分组 HK-2细胞使用培养基DMEM/F12加入10%胎牛血清(FBS)和1%双抗(P-S)青霉素100 U/mL+链霉素100 μg/mL，培养条件37℃、5%CO2。从液氮中取出HK-2的冻存细胞，迅速放置于37℃水浴箱中复苏细胞；离心管中准备适量培养液(8～10 mL)，将HK-2细胞液移入离心管中；1000 rpm离心3 min，弃去上清，加入适量培养液制成细胞悬液，转移至培养皿中继续培养，在细胞呈单层生长达80%时则进行传代。……