赵芳芳 迟博 李大海 冯君桃

(广西医科大学第一附属医院妇产科，广西 南宁 530021)

宫腔粘连(Intrauterine adhesions，IUA)是由于子宫内膜损伤、纤维化，最终导致宫腔闭塞的妇科常见病，多因人工流产术、宫腔手术及感染引起，目前临床治疗主要以宫腔镜分离术、物理屏障放置、激素周期治疗及中药方剂治疗等方法为主[1]。桃红四物汤为中医调经名方，能有效改善妇科各类疾病。临床研究表明，桃红四物汤对宫腔粘连具有良好的疗效[2]，但其对IUA的作用机制尚未阐明。NF-κB/TGF-β1/Smad通路介导的子宫内膜纤维化是IUA重要的发病机制[3-4]。本研究拟选取IUA大鼠模型为研究对象，予以桃红四物汤高、中、低剂量进行治疗，基于NF-κB/TGF-β1/Smad通路探讨桃红四物汤治疗IUA的作用机制，旨在为IUA的防治提供新的思路和依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料 8～10周龄的雌性SD大鼠购于广西医科大学实验动物中心，SPF级，体质量250～280 g，共50只，生产许可证号：SCXK(桂)2014-0002。桃红四物汤(桃仁、当归、白芍各9 g，红花、川芎各6 g，熟地黄12 g)饮片由我院药剂科提供，参照文献[5-6]将饮片用75%乙醇提取浓缩至生药含量为2 g/mL提取液。本研究按照动物伦理要求，并经医院伦理委员会审核批准。

1.2 实验主要试剂及仪器 琼脂糖(Solarbio A8201-10g)、TRIzol Reagent(Invitrogen，15596026)、逆转录试剂盒(Takara，RR047a)、SYBR Green qPCRMix(Monad，MQ10301)、BCA蛋白定量试剂盒(Solarbio PC0020)、ECL化学发光底物(超敏)(Biosharp BL523A)、Anti-α-SMA一抗(abcam, ab32575)、Anti- Col Ⅰ一抗(abcam, ab34710)、Anti-FN一抗(abcam, ab34710)、Anti-NF-κB一抗(CST 8242)、Anti-p-NF-κB一抗(Santa Cruz sc-136548)、Anti- TGF-β1一抗(abcam, ab92486) 、Anti-p-Smad2一抗(abcam, ab53100)、Anti-Smad2一抗(abcam, ab33875)、Anti-p-Smad3一抗(abcam, ab52903) 、Anti-Smad3一抗(abcam, ab40854)、Anti-Smad7一抗(Santa Cruz sc-101152)、Anti-p-SMAD7一抗(Bioss antibodies, bs-20024R)、 Anti-β-actin一抗(abcam, ab8227)、山羊抗鼠二抗(Sigma A9309)、山羊抗兔二抗(Sigma A9169)、Rat TNF-α ELISA Kit(Elabscience E-EL-R2856c)、Rat IL-18 ELISA Kit(Elabscience E-EL-R0567c)、Rat IL-6 ELISA Kit(Elabscience E-EL-R0015c)、实时荧光定量PCR仪(Agilent Technologies，G8830-64001)、多功能酶标仪(美国MD FilterMax F3)、电泳转膜仪(Bio-Rad PowerPac Basic)、凝胶成像系统(上海天能Tanon 5200)、NanoReady超微量紫外可见分光光度计(杭州遂真生物FC-1100)。

1.3 IUA模型建立 为避免不同月经周期体内雌孕激素水平变化对检测结果的影响，常规阴道涂片进行观察，于大鼠动情期进行手术。……