张建民，占炳东，陈旭富，曹国平，王双青，吕 磊，杨瑞军，叶承华

莱姆病是一种全球性的蜱媒传染病，由经蜱叮咬传播的伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferi)感染所致[1]。20世纪70年代该病在美国首次发现，1982年Burgdorfer 从蜱类及感染患者的体内分离出伯氏疏螺旋体[2]。

我国于1985年首次在黑龙江林区内发现莱姆病患者，迄今全国各省/自治区/直辖市(含台湾地区)均有莱姆病病例报告[3]，同时也从可疑莱姆病病人血清中检测出抗体阳性[4]。衢州市目前尚无典型莱姆病病例报告，但有明确的血清抗体阳性的疑似病例报道，人群中存在莱姆病感染[5]，并且衢州市有明确的蜱及蜱媒传染病分布[6]报道。

为深入研究莱姆病螺旋体在我市鼠类中的感染情况，间接评估莱姆病的感染风险，我们采集衢州市部分县区的鼠类标本开展莱姆病螺旋体核酸检测。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 标本采集 2014-2017年，在柯城、开化乡镇的农田、山林处捕获鼠类，经无菌解剖后，取鼠脾置于无菌冻存管中，于-80 ℃存放。

1.1.2 试剂 TIANGEN血液/组织/基因组DNA提取试剂盒(cat#DP304-03)；DreamTaqTMGreen PCR Master Mix (2X) 预混反应体系(Thermo K1082)。

1.1.3 仪器 宁波新芝Scientz-48高通量组织破碎仪，Eppenderf5425高速离心机, BIO-Rad扩增仪，BIO-Rad HE-120en电泳仪,BIO-Rad Chemi DocTMXRS+凝胶成像系统。

1.1.4 巢式PCR扩增引物靶序列 莱姆病螺旋体核糖体5s-23s基因间隔区(第1轮23s3/23sa，第2轮23s5/23s6)。见表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequence

1.2 方 法

1.2.1 DNA提取 取鼠脾10 mg左右，采用组织破碎仪破碎后制成细胞悬液，按TIANGEN(cat#DP304-03)提取试剂盒说明书对样品进行DNA提取。-40 ℃保存，备用。

1.2.2 巢式PCR检测 采用30 μL 反应体系，第1轮反应体系:2×Mix 15 μL，上游引物(10.0 μmol/L) 0.8 μL， 下游引物(10.0 μmol/L)0.8 μL，模板3.0 μL，ddH2O 10.4 μL，总体积30.0 μL 体系。第2轮反应体系: 2×Mix15 μL，上游引物(10.0 μmol/L) 0.8 μL， 下游引物(10.0 μmol/L) 0.8 μL，模板1.0 μL，ddH2O 12.4 μL，总体积30.0 μL 体系。……