余 平 李叶子 万少兵

(湖北省武汉市第三医院急诊科，武汉市 430060，电子邮箱：y94eay@163.com)

心肌纤维化又称心肌钙化，是由心脏代谢异常、心肌缺血以及冠状动脉硬化等多种因素引起的一种疾病，呈持续性或反复加重，可逐渐发展为心力衰竭，即慢性缺血性心脏病[1-2]。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)水平升高是发生心肌纤维化的重要原因之一，其可以直接或间接导致血管内皮细胞损伤，增强血小板功能，从而促进血栓形成[3-4]。故本实验使用Hcy诱导CF以建立心肌纤维化细胞模型。沉默信息调节因子(sirtuin，SIRT)1为哺乳动物SIRT家族成员之一，可以使多个蛋白质去乙酰化而改变其活性，通过调节SIRT1可以调控细胞能量代谢、氧化应激等多种生物作用[5]。p53蛋白的主要作用包括阻滞细胞周期、促进细胞凋亡等[6]。有研究表明，SIRT1可通过将p53蛋白的第382位赖氨酸残基乙酰化，降低p53蛋白与DNA顺式元件的结合能力，从而抑制细胞凋亡[7]。本实验旨在研究抑制SIRT1/p53通路对Hcy诱导的心肌纤维化的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞和试剂 心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF)购于中科院上海细胞库(批号：234015)；Hcy购自武汉博士德生物工程有限公司(批号：780346)；SIRT1/p53通路抑制剂EX527购自北京四季青生物科技有限责任公司(批号：2220216)；杜氏改良伊戈尔培养基(Dulbecco′s modified Eagle medium,DMEM)、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶购于美国Abcam公司(批号：10247、55930、77380)；细胞计数检测(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒购于北京鼎国科技有限公司(批号：2300089)；膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)试剂盒购于天津百赛斯生物科技有限公司(批号：1113076)；TRIzol试剂盒、反转录试剂盒购、SYBR Premix Ex Taq Ⅱ购于日本TaKaRa公司(批号：2340754、3476208、2502179)；……