洪晓泉 傅锦波 林福生 罗晔哲 林恩德

（厦门大学附属中山医院普通外科 福建厦门361004）

结直肠癌（Colorectal Cancer）是近年来发病率和病死率上升显著的一类癌症，在世界范围内，其发病率位居第三，病死率位居第四，且在发达国家和地区更为多见[1～3]。鸢尾黄酮（Tectorigenin）是鸢尾科植物射干中的一种成分，研究表明其具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种作用，并可能对细胞自噬过程存在影响[4～6]。自噬性死亡（Autophagic Cell Death）是指依赖于自噬过程的程序性细胞死亡。对细胞自噬过程的干预可能导致细胞稳态调节机制的失衡，从而导致细胞死亡[7～9]。本研究分析了鸢尾黄酮对结肠癌细胞自噬水平的影响，并通过联合使用抑制剂及下调自噬过程关键蛋白探究鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性及凋亡的影响。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 细胞株来源和制剂 人结肠癌细胞株SW480和正常人结肠细胞系CCD 841 CoN购自美国模式培养物集存库（American Type Culture Collection,ATCC）。高糖DMEM培养基、胎牛血清、双抗购自美国Hyclone公司。鸢尾黄酮购自Sigma-Aldrich公司。凋亡抑制剂Z-VAD-FMK（S7023）、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（S7243）、坏死性凋亡抑制剂（S8037）购自美国Selleck公司。CCK-8试剂购自博士德公司。兔抗人p62（#8025）、兔抗人LC3（#3868）抗体购自美国CST公司，鼠抗人GAPDH（#AC033）购自武汉爱博泰克公司。Trizol、Lipofectamine 2 000试剂购自美国Thermo Fisher公司。SiATG5及siNC由锐博生物科技有限公司负责构建。

1.2 研究方法

1.2.1 人结肠癌细胞系SW480细胞培养 在加入双抗的含10%胎牛血清的DMEM培养基中，37℃、5%CO2的条件下于培养箱中培养，每1～2天更换新鲜培养基或进行细胞传代。

1.2.2 CCK-8法检测细胞增殖活性及半抑制浓度（IC50）曲线的绘制 取对数生长期的人结肠癌细胞SW480和正常人结肠细胞系CCD 841 CoN，以10^4 CCU/ml的密度种于96孔板中并加入100μl培养基，置于培养箱中培养。……