任金瑞，李均同，赵效南，吴香菊，王曦，丛晓燕，戴美学，杜以军，刘玉庆，齐静

（1.山东师范大学生命科学学院，山东 济南 250014；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疾病防治与繁育重点实验室，山东 济南 250100）

中国肉鸭数量和肉鸭产业位居世界第一［1］。鸭疫里默氏杆菌是水禽特别是肉鸭养殖中最重要的细菌性疾病之一，主要引起1～8周龄特别是2～3周龄雏鸭发病和死亡，并以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎等为病理特征，死亡率达50%左右，与大肠杆菌引起的临床特征非常相似，且二者的混合感染现象非常严重［2-5］；该菌也会导致5～17周龄鹅感染（感染率9.9%）和12～19周龄火鸡发病（发病率0.5%）［6］。大肠杆菌和沙门氏菌对鸡、鸭、鹅等家禽的混合感染也非常普遍和严重［7-10］。这3种革兰氏阴性致病菌血清型众多且宿主范围广，给禽类养殖带来巨大的危害和经济损失，是禽类感染的常见重要病原菌。由这些病原菌导致相关食源性感染危及人类公共卫生安全，因此建立一套这3种常见病原菌单一或混合感染的快速检测体系意义重大。

PCR技术在临床诊断中的应用已较为广泛［11-13］，多重PCR检测方法也得到了快速发展和应用［14，15］，该技术检测成本低、效率高，可实现核酸水平上疾病的快速检测和诊断。因此，本试验通过选择鸭疫里默氏杆菌的ompA、大肠杆菌的phoA和沙门氏菌的fimW保守基因的特异性引物，构建了多重PCR检测体系，优化了引物的退火温度和使用浓度等反应条件，检测了其特异性和敏感性，并在临床样本中进行了吻合性检测，实现了从临床病料中直接、快速、准确诊断这3种病原菌的单一或混合感染，以期防控细菌性疾病感染，减少对养禽业造成的经济损失。……