蔡欢嫦，周丹茹，史天静，尹亚军，张大伟，张 瑾

(嘉兴学院 生物与化学工程学院，浙江 嘉兴 314001)

肝纤维化(liver fibrosis)是胞外基质过度积累的病理生理学过程，由持续的肝损伤和异常修复程序引起，不断发展将转变为肝硬化乃至肝癌[1-2]。近年来发现免疫细胞与肝纤维化进程关系密切，自然杀伤细胞(natural killer，NK)和1型辅助性T细胞(T helper type 1 cells,Th1)抑制肝纤维化，而巨噬细胞(macrophage)和2型辅助性T细胞(T helper type 2 cells,Th2)起促进作用[3]。因此，相关功能分子的探究将是纤维化干预的重要理论基础。补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(complement C1q/tumor necrosis factor-related protein 6,CTRP6)是调控脂肪细胞增殖与分化、三酰甘油积累和脂肪酸氧化等过程的新型脂肪因子[4-5]。它参与机体免疫细胞分布的调节，并通过改变IL-10、TNF-α和IL-1β等细胞因子的水平影响免疫应答[6-7]。尽管研究显示CTRP6缺陷致使肝癌细胞增殖和转移受到抑制[8]，但对其调控肝癌免疫细胞浸润和肝病进程的认识仍不清楚。本研究通过分析肝纤维化CTRP6敲除小鼠的病理学与分子表达特点，揭示CTRP6在肝病发展进程中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物：8周龄体质量相近雄性野生型(CTRP6+/+)和敲除型(CTRP6-/-)小鼠共计24只，以C57BL/6J为遗传背景，CTRP6基因敲除小鼠委托剑桥基因组中心(苏州大学)构建，饲养于嘉兴学院医学院SPF级鼠房，条件为(25±1)℃，40%～60%相对湿度，12 h明暗循环照明。

1.1.2 主要试剂：康仕兰特级初榨橄榄油(Aceites Ybarra S.A.)；四氯化碳(江苏强盛功能化学股份有限公司)；丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)；RNA提取试剂Trizol(Invitrogen公司)；HiFiScript gDNA Removal cDNA合成试剂盒和Plus SYBR real-time PCR mixture(康为世纪生物科技有限公司)。……