蔡君艳

(东南大学附属中大医院 心血管内科，江苏 南京 210000)

高胆固醇血症(hypercholesterolemia)是冠心病、脑梗死等心血管疾病的独立危险因素，严重威胁人类健康。控制高胆固醇血症能够有效降低心脑血管疾病的发生。目前临床上主要采用他汀类药物降低胆固醇，而口服他汀类药物时患者会出现乏力、肌肉酸痛、肝脏转氨酶升高甚至横纹肌溶解等不良反应。因此，探寻新型降低胆固醇的药物具有重要意义。microRNAs是一类由内源基因编码、长度约22个核苷酸的小非编码单链RNA分子。它可与信使RNA的特定序列结合，参与转录后基因表达调控，在一系列生理、病生理过程中发挥重要作用[1]。miR-29b在高血压、心肌病等疾病中发挥重要作用，但对高胆固醇血症的作用尚未见报道[2-3]。本研究以高脂喂养小鼠为研究对象，观察miR-29b对胆固醇代谢的影响，并探讨可能的机制，为发现新型降胆固醇药物提供思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物:45只SPF级C57/BL6雄鼠(体质量20～22 g)(北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格号：NO.201807103)。

1.1.2 主要试剂:高脂饲料含15%脂肪，1.25%胆固醇，0.5%胆酸钠(北京维通利华实验动物技术有限公司)；乱序无意义阴性序列(scrambled shRNA)、miR-29b抑制剂(miR-29b antagomir)(广州锐博生物科技有限公司)；总胆固醇测定试剂盒、三酰甘油测定试剂盒、RNA trip和BCA蛋白定量试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司)；鼠抗Actin抗体(Santa Cruz Biotechnology公司)；兔抗SIRT1抗体(Cell Signaling Technology公司)；兔抗SREBP2抗体(Abcam公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠的分组及处理：将小鼠分为：正常饮食组(Con组，n=10)、高脂饮食组(HF组，n=10)、正常饮食+miR-29b抑制剂对照组(Con+shRNA组，n=6)、正常饮食+miR-29b抑制剂组(Con+antago组，n=6)、高脂饮食+miR-29b抑制剂对照组(HF+shRNA组，n=6)、高脂饮食+miR-29b抑制剂组(HF+antago组,n=6)。……