肖士东，刘艳锋，周详，姜顺明

（建德市第一人民医院，浙江 建德 311600）

错配修复基因功能缺陷是肿瘤发生的重要因素。在其产生异变时，错配修复功能缺失，进一步影响DNA复制及合成，造成遗传的不稳定性，最终引起细胞的癌变。近年来，相关研究证实相关区域的GpG岛甲基化可能会导致肿瘤抑制基因失活[1]，DNA甲基化可能影响抑癌基因和错配修复基因，具体而言就是肿瘤抑制基因和错配修复基因启动子区域CpG岛的甲基化可能阻碍启动子与转录因子的结合，从而促进肿瘤的发生和发展[2]。目前，国内暂无鼻咽癌中hMLH1基因启动子甲基化的相关研究。本文应用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸氢盐修饰后测序（BSP）测定1个正常鼻咽上皮细胞株及20例正常鼻咽上皮组织、5个鼻咽癌细胞株及60例鼻咽癌组织hMLH1基因启动子区甲基化水平，分析hMLH1基因启动子区甲基化状态和鼻咽癌发生发展的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 60例鼻咽癌组织标本均为本院2012年5月-2016年5月初次确诊的患者，20例正常鼻咽上皮组织来自本院行鼻中隔矫正术患者鼻腔后上段近鼻咽部组织，另选本院1例体检健康者的外周血淋巴细胞作为阳性对照。60例鼻咽癌患者年龄 23-74 岁，平均（43.2±5.7）岁，其中男 32 例，女28例；TNM分期T1-T2期 45例，T3-T4期15例。N0期26例，N1-N3期34例；临床分期：Ⅰ-Ⅱ期24例，Ⅲ-Ⅳa期36例；病理分型：低分化鳞癌43例，未分化癌17例。5个鼻咽癌细胞株（CNE1、CNE2、TWO2、HNE1、HONE1）全部购于上海雅吉生物有限公司，正常鼻咽上皮细胞株NP69购于上海泽叶生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 生物信息学预测 在线使用NCBI检测hMLH1在基因组的位置，METH-PRIMER软件分析hMLH1启动子区有无典型CpG岛，同时在线设计MSP及BSP特异性引物。……