王晓兵　龚志婷　姜乐　马文豪　贺尔姝　郑晓烨　张本斯　张丽梅

摘要：目的：构建携带MC1R基因的重组腺相关病毒并探究小鼠海马齿状回中过表达MC1R基因对小鼠长期记忆的影响。方法：获取小鼠目的基因MC1R。使用限制性内切酶EcoRI和HindIII双酶切AAV载体质粒pAAV-CaMKIIα-eGFP-Dnmt3a及目的基因，使用T4DNAligase进行连接，连接产物转化stbl3感受态细胞并筛选阳性克隆pAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R，并进行测序验证。将构建的pAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R、PAAV-DJ/8、pHelper质粒转染至HEK293T细胞进行病毒包装及纯化并利用Q-PCR检测病毒滴度。纯化后的病毒通过立体定位注射到小鼠海马齿状回中，表达14天以上后，验证该病毒是否能够提高小鼠海马区的MC1R基因表达，并检测小鼠在旷场实验及条件性恐惧实验中的行为学改变。结果：rAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R过表达病毒构建成功，滴度约为1.1*1010，立体定位注射到小鼠海马齿状回中至少14天后小鼠海马齿转回中能表达绿色荧光蛋白，并能显著提高小鼠海马中MC1R基因的表达。进一步的，过表达MC1R基因对小鼠旷场实验中的自发活动、焦虑状态均无影响，但显著提高条件性恐惧实验中的僵立水平。结论：本研究成功构建了重组腺相关病毒rAAV-CaMKIIα-eGFP-MC1R，通过立体定位注射，该病毒显著提高小鼠海马齿状回中MC1R基因的表达，并增强小鼠的长期记忆。我们的结果说明MC1R基因可能是一个记忆损伤类疾病如阿尔兹海默症的一个潜在治疗靶点。

关键词：MC1R;腺相关病毒;海马齿状回;

【中图分类号】G644.5             【文献标识码】A             【文章编号】2107-2306（2021）12--03

前言：黑素皮质素1受體（MC1R）是一种环腺苷单磷酸刺激g蛋白偶联受体（GPCR）[1-4]，同时是MSH（α、β、γ）和ATCH的受体[1，2，5-7]，调节黑色素的形成，通过控制cAMP信号从而影响黑色素细胞，通过黑色素合成途径调节皮肤生理。……