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下调ROR1表达削弱黑色素瘤疫苗抗瘤效应

2021-12-06王玲梅峰薛蕊李淼徐慧赵枫姝窦骏

现代免疫学 2021年6期
关键词:小鼠血清检测

王玲,梅峰,薛蕊,李淼,徐慧,赵枫姝,窦骏

(东南大学医学院 病原生物学与免疫学系,南京 210009)

黑色素瘤是一类高度异质性的肿瘤,其发病率和死亡率近年来持续上升,晚期黑色素瘤患者的10年生存率仅为10%~25%[1-2]。尽管传统的放化疗、免疫调节药物和靶向治疗在临床试验中取得了令人鼓舞的成果,但患者易产生耐药性,造成疾病复发。而肿瘤异质性可能是黑色素瘤靶向治疗耐药的重要原因之一[3-7]。为克服耐药并有效治疗黑色素瘤,亟需寻求新的治疗方法。

受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1, ROR1)是单次跨膜受体酪氨酸激酶,可促进肿瘤的形成和转移,是疾病诊断的标志物之一,也是肿瘤治疗的理想靶点之一[8-11]。近年来,已有文献报道ROR与许多血液和实体恶性肿瘤的形成有关,如淋巴细胞白血病[12-13]、卵巢癌[14-16]、乳腺癌[17]以及肺癌[18]等。但关于ROR在恶性黑色素瘤中的研究报道相对较少。因此,本研究以鼠源黑色素瘤细胞系B16F10为研究对象,用慢病毒载体介导shRNA下调ROR1分子的表达,通过肿瘤疫苗免疫C57BL/6小鼠实验,观察下调ROR1分子表达后免疫鼠的免疫活性和抗瘤效应,并初步探讨其分子机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象黑色素瘤B16F10细胞系,购自中国科学院细胞库;293T、YAC-1、Scramble和Lv-shROR1-B16F10细胞,由东南大学医学院病原生物学与免疫学系窦骏课题组保存并提供。SPF级雌性C57BL/6小鼠,15只,6~8周龄,体质量约16 g,购自扬州大学比较医学中心。

1.3 细胞的培养将B16F10、Scramble和Lv-shROR1-B16F10细胞重悬于含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37 ℃、5% CO2恒温培养箱中培养。

1.4 慢病毒的包装……

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