郭银谋，王玉梅，陈贡斌，岳培茹，周威

(商丘市第一人民医院 肿瘤一科，商丘 476100)

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，转移和侵袭性较强，患者确诊时多为晚期，且目前年轻人结肠癌的死亡率有升高趋势[1]。现阶段，结肠癌的分子靶向治疗给中晚期结肠癌患者的治疗提供了新的选择。结肠癌中差异表达的miRNA可能是结肠癌的诊断标志物或治疗靶点[2]。研究表明，miR-3619-5p可抑制恶性肿瘤进展，在前列腺癌[3]、乳腺癌[4]、膀胱癌[5]中表达下调。本研究通过StarBase预测发现，6磷酸果糖2激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2，6-biphosphatase 3，PFKFB3)可能是miR-3619-5p的靶基因。PFKFB3已被证明在结肠癌组织中表达上调，其miRNA水平的高表达与患者恶性表型及不良预后相关[6]。但miR-3619-5p在结肠癌组织中的表达、作用及其与PFKFB3的关系目前尚未可知。因此，本研究假设miR-3619-5p通过靶向PFKFB3影响结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，并对此进行验证。

1 材料与方法

1.1 材料选取2018年3月—2019年3月于河南省商丘市第一人民医院病理检查确诊为结肠癌的患者手术切除的结肠癌组织及癌旁组织(距离结肠癌组织边缘>1.5 cm)各35例，患者男性16例、女性19例，年龄(49.2±16.9)岁。所有患者术前未接受放疗和化疗，并对研究知情同意。

人结肠癌细胞株HCT116购自北京北纳创联生物技术研究院；胰蛋白酶购自Sigma-Aldrich公司；RPMI 1640培养液、FBS购自Gibco公司；Lipofectamine 2000转染试剂、RNA提取试剂TRIzol、Real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司；CCK-8检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；PFKFB3过表达载体(pcDNA-PFKFB3)、PFKFB3抑制物(si-PFKFB3)、miR-3619-5p模拟物(miR-3619-5p)、miR-3619-5p抑制剂(anti-miR-3619-5p)、阴性对照(pcDNA、si-NC、miR-NC和anti-miR-NC)、PFKFB3野生型(WT-PFKFB3)和突变型(MUT-PFKFB3)双荧光素酶报告载体均购自上海吉玛制药有限公司；P……