朱 琳，韩瑞芳，王培红，李 轩,

0引言

目前，眼表炎症的患病率仍然较高，且重度的眼表炎症对患者生活质量造成了极大的影响，使其治疗成为日益严重的医疗保健问题。临床上许多眼科疾病与眼表炎症相关，包括感染、干眼、眼睑疾病、理化损伤等[1]。眼表炎症中往往伴随着氧化应激的发生[2-3]。氧化应激中过量产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)可通过靶向DNA、蛋白质和细胞内通路诱导细胞损伤[4]。因此，细胞内ROS的过度生成被认为是眼表炎症在内的眼表疾病发病机制的关键因素[5]。白藜芦醇(resveratrol,RSV)是一种植物多酚。研究证实，RSV在葡萄膜炎、糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等眼部疾病中可发挥抗氧化和抗炎的保护作用[6-8]。但目前，RSV在眼表炎症中的研究鲜有报道。因此，本研究应用人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)探讨了RSV的抗炎和抗氧化作用，以期为眼表炎症的治疗提供新的思路。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1细胞HCECs细胞(美国ATCC)。

1.1.2主要试剂肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α,美国R&D SYSTEMS)、RSV(美国SIGMA)、RPMI-1640培养基(美国Hyclone)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS,美国Gibco)、青链霉素混合液(青霉素10×103U/mL，链霉素10×103μg/mL，美国Gibco)、2.5g/L胰蛋白酶(美国Gibco)、细胞总RNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)、实时定量PCR引物(北京赛百盛基因技术有限公司)、MMLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶(美国Promega)、TB Green Premix Ex TaqII(日本Takara)、人IL-6/IL-8酶联免疫检测(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒(安徽巧伊生物科技有限公司)、BCA蛋白浓度测试试剂盒(美国Thermo)、核蛋白-胞浆蛋白提取试剂盒(美国Thermo)、蛋白marker(美国Biotopped)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)抗体(ab 16502,美国Abcam)、Histone H1抗体(ab 134914，美国Abcam)、GAPDH抗体(ab 181602,美国Abcam)、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记的山羊抗兔二抗(A11034,美国Thermo)、RDye 800CW山羊抗兔二抗(C70926-05,美国LI-COR)、MTT溶液(美国Soiarbio)、ROS检测试剂盒(美国Soiarbio)。……