黄静，彭彬

(川北医学院形态学研究所电镜结构研究室，四川 南充 637000)

实验样品的选择制作是临床及科研工作的重要环节，取样时样品大小、取样部位、取样后固定液的选择、固定时间等对实验成败至关重要。而样品制作中，锇酸配制和使用方法、包埋剂的选择、渗透时间温度设置、组织修块、超薄切片室的环境条件、染色处理等，会对实验结果产生较大影响。如何保证样品的质量是电镜工作技术人员面临的实际问题。现将样品的取材固定及后期处理的关键技术和注意事项予以总结，以期望为临床和科研人员提供一些帮助。

1 常规透射电镜样品的取材及固定

1.1 取材要求及注意事项

“快、小、利、净、准、冷”是取材的基本要求。“快”是为了避免组织细胞因缺血缺氧导致自溶，破坏超微结构；“小”由于电镜使用的固定液戊二醛的渗透速率慢(仅为0.5 mm/h)，为避免固定不充分，取材大小以1 mm3为宜；“利”是取材工具要锋利，以避免取材工具来回拉扯组织造成人为假象；“净”是避免组织取材时残留血迹污迹，影响实验结果；“准”是针对取材的部位要准确，尤其是需要定位的组织(肠道、呼吸道、眼组织、皮肤、神经等)[1]；“冷”可以降低酶活性，避免组织细胞因环境温度、固定液温度而加速自溶，破坏超微结构。因此，所用实验容器、溶液和器械均需要预冷。以上各个环节均会影响到最终实验结果[2-3]。

1.2 固定液的选择

固定的作用是尽可能使组织和细胞接近其生存时的状态，减少动物死亡后组织细胞的变化，使细胞器的精细结构完好无损的保存下来，同时使细胞内各种成分固定，避免在后续操作中因冲洗、脱水等环节的溶解和消失。……