张明烁，叶田园，祝娜，黄秀兰，李志勇

(1.中央民族大学药学院，北京 100081；2 山东中医药大学实验中心，济南 250355)

土家族用天麻配伍延龄草防治“脑衰”病，本课题组前期实验证明，天麻配伍延龄草可以增强双侧颈总动脉结扎所致的痴呆大鼠的学习记忆能力，促进神经递质合成、保护脑细胞[1-2]。天麻素(gastrodin，Gas)是中药天麻的主要活性成分，在抗氧化、抗炎、抗凋亡、改善缺血缺氧造成的脑损伤、保护神经元等方面具有良好的活性[3-4]。薯蓣皂苷元(diosgenin，Dio)是中药延龄草的主要活性成分，具有保护血管、保护神经、抗炎、抗氧化应激等多种药理作用[5]。有效组分配伍是近年来出现的配伍研究新模式，从复方中各层次(部位-组分-成分)药效物质出发，具有作用明确、靶位清楚、对病证针对性更强等优点[6]。本研究通过基线等比增减设计确定Gas和Dio的配伍比例，并利用主成分分析方法在谷氨酸损伤的SH-SY5Y细胞模型和缺氧HUVECs上优选出最佳配伍比例，并在分子水平研究最佳配伍比例对缺氧HUVECs中HIF-1α、VEGF、iNOS、eNOS蛋白表达的影响，初步探讨其可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1受试细胞 SH-SY5Y细胞由中国中医科学院医学实验中心惠赠。原代HUVECs购自中国医学科学院基础医学研究所。

1.2药物与试剂 天麻素标准品(中国食品药品检定研究院，批号：110807-201407)、薯蓣皂苷元标准品(中国食品药品检定研究院，批号：111539-200001)；谷氨酸(北京拜耳迪生物技术公司分装)；Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，批号：C1063)；内皮细胞培养基(endothelial cell medium，ECM)(Science cell，批号：1001)；活性氧检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司，批号：S0033)；……