韩 笑，王亚楠，姜金庆，范国英，李任峰，王自良

(河南科技学院 动物科技学院，河南 新乡 453003)

猪肠道冠状病毒(swine enteric coronavirus，SECoV)属于SECoV属于尼多病毒目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)，是有囊膜的单股正链RNA病毒。病毒表面有棒状突起，形似“日冕”或皇冠状，大小为70～200 nm[1]。SECoV基因组含有5’端的帽子结构和3’端的Poly(A)结构，编码四种主要结构蛋白，即纤突蛋白(Spike, S)、核衣壳蛋白(Nucleocapsid, N)、膜蛋白(Membrane, M)、包膜蛋白(Envelope, E)[2-5]。由于其RNA具有较高的重组频率，导致病毒结构不稳定，容易变异。目前已知的SECoV主要包括猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastrogenteritis virus，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)以及猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus，SADS-CoV)[6-8]。

近年来，SECoV的流行与进化越来越复杂，毒株间和毒株内重组现象加剧，防控形势依然严峻[9]。本文就目前SECoV的核酸和免疫学检测方法进行综述，旨在为SECoV的防控提供参考依据。

1 核酸检测技术

1.1 聚合酶链式反应

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种通过体外扩增病原特定DNA序列从而对疾病进行诊断的分子生物学技术。该技术诞生于1985年，经过不断改进已衍生出多种体外扩增方法。Ding等[10]基于TGEV、PEDV和PDCoV的N基因、猪A型轮状病毒(porcine rotavirus A，PRoV-A)VP7基因以及猪库布病毒(porcine kobuvirus，PKV)和猪萨博病毒(porcine sapovirus，PSaV)的多聚蛋白基因建立了多重逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法，该方法能同时检测TGEV、PEDV、PDCoV、PRoV、PKV和PSaV六种猪肠道病毒，与猪的其他病原之间无交叉反应。随着技术的不断进步，荧光定量PCR(quantitative PCR，qPCR)的出现解决了普通PCR技术存在的难以定量、变异系数较大等问题。Pan等[11]针对PEDV、猪环曲病毒(porcine torovirus，PToV)和SADS-CoV的ORF1a区域以及PDCoV的ORF1b区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针，建立了能够同时检测PEDV、PDCoV、SADS-CoV三种猪冠状病毒和PToV的RT-qPCR方法，该方法的灵敏度可以达到100拷贝/μl。……