高天佐 杨少艳 吴美丽 马冬 王玉超 许春雨 刘红祥

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2021.11.035

摘要：通过送检案例结合实验室临床检测，常遇到临床表现关节肿胀、瘫痪的病禽，关节剪开后可见大量浑浊液体，进行细菌分离，分离到明显的葡萄球菌，且多与其它病原继发或并发感染;通过流行病学与试验数据显示，葡萄球菌存在家禽、水禽多组织脏器中;产蛋下降鸡群与一些肝脏坏死、出血、易碎、破裂样本中也常分离到细菌，葡萄球菌也是其中一部分，对肝脏破裂样本进行内毒素检测，临床明显细菌病鸡群的内毒素均超标。

关键词：病禽;临床;解剖;细菌分离;诊断;防治

1 案例分享

1.1 送检信息

山东某规模化养殖公司，7个栋舍，其中1个公鸡栋舍与1个母鸡栋舍从18周龄开始出现瘫痪，前期腿部未发现明显病变，现23周，期间陆续出现单腿跛行，跗关节肿胀，公鸡490～500只/舍，現每栋每日约出现10只左右，约2%，母鸡5，500只/舍，每天出2～3只，约0.5%（注：公鸡相比母鸡体型明显偏大），明显瘫痪鸡单独抗生素治疗效果不理想，只能淘汰。

1.2 解剖症状

公鸡与母鸡主要表现跗关节皮下渗出、干酪物，爪垫干酪物。

1.3 实验室检测

RT-PCR/PCR：采集关节组织与棉拭子样本，将关节组织进行强烈破碎，使用生理盐水/PBS按照1：4～1：5的比例混匀（组织占20%～25%）。

细菌分离：采集病变明显（肿胀）跗关节，在肿胀明显位置清洁后碘液作用1～3min，随后75%酒精脱碘，用无菌眼科剪将肿胀部位剪开，用接种环采集肿胀部位脓性渗出液，接种到TSA（胰蛋白酶大豆琼脂）与麦康凯培养基中标准分区涂菌后放入37℃培养箱中培养12～24h后取出，在TSA培养基中为明显金黄色、实心菌落，麦康凯培养基中未生长，取TSA中培养好的细菌用接种环无菌采集单菌落，涂入甘露醇培养基中，放入培养箱12～24h后出现明显纯黄色菌落。

1.4 结论

送检关节组织与棉拭子样本通过RT-PCR/PCR检测，均未检测到病毒性关节炎与滑液囊支原体的目的性基因条带。

检跗关节通过细菌分离，从病变部位分离到葡萄球菌。

2 流行病学

葡萄球菌广泛分布在自然界中，可经接触和空气传播，是一种条件性疾病，能产生多种毒素和酶，污染严重、外伤感染与机体抵抗力低是发病的主要原因。一年四季均可发生，夏秋高温多雨季节多发;鸡胚、0～1日龄雏鸡以及数百日龄蛋/种鸡、肉种鸡等各个阶段鸡群都可发生，雏鸡感染后发病严重;该病原不但明显外伤感染、关节肿胀可分离到，还可存在于健康鸡体表、鼻腔、肝脏、心脏、精液、卵黄、输卵管等组织器官。

疾病感染、管理不适等应激因素造成鸡群抵抗力下降、皮肤黏膜受损、瘫痪等也给本病感染创造了有利条件（表1）。

将近期实验室葡萄球菌分离情况进行了统计（图1），数据显示家禽中肉种鸡占比最高，其次蛋/种鸡、白羽肉鸡、黄羽肉鸡（相对存栏量较少）;水禽送检样本占家禽的19%;数据中“其它”样本包含鸡胚、精液、环境拭子等。

3 临床与解剖

根据感染部位不同主要分为关节炎型、皮肤型、脐炎型、内脏型、眼型等。

1）关节炎型：以30～65日龄肉用型及大日龄体偏重鸡群多发，主要表现喜卧、关节肿大（如图2）、站立困难，驱赶时可勉强行动，肿胀部位剪开后明显浆液性浸润（如图3），病程时间长会形成黄色干酪物、部分出血发生明显变性（如图4）。

2）皮肤型：造成外伤等因素使破溃部位感染葡萄球菌后发生皮炎，羽毛易脱落;皮肤充血、出血、糜烂、有渗出物，恶臭（如图5、图6）。

3）脐炎型：孵化和出雏器中的条件较适合细菌生长，刚出壳雏鸡脐孔开张、免疫系统发育不成熟，雏鸡脐带愈合不良易感染导致死亡或慢性感染;脐孔发炎肿大，腹部膨胀，皮下充血、出血，有黄色胶冻样渗出物，俗称“大肚脐”。

4）内脏型：该病肉鸡、蛋鸡都有，发病相对较急，肝脏、脾脏及肾脏密集大小不一的黄白色坏死点，腺胃黏膜有弥漫性出血（如图7）和坏死。

5）眼型：表现为上下眼睑肿胀，闭眼，有脓性分泌物粘连。眼结膜红肿，时间较长鸡只双眼失明。

4 鉴别与诊断

4.1 细菌分离

致病葡萄球菌病原体是金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性菌，显微镜下为蓝色圆形或卵圆形“实心”球菌（如图8），常呈葡萄状排列，不形成芽孢，无鞭毛，无运动性，多数金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在;其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的菌株可被染成革兰氏阴性;需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧，28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，pH为4.5～9.8，最适为7.4;营养要求不高，普通营养琼脂培养基即可生长（如图9），麦康凯培养基不生长，在含有血液的培养基上生长效果更好，多数致病菌株在血液培养基上菌落四周出现溶血环、在甘露醇培养基上显黄色。

4.2 生化反应

取分离到的细菌加入生化鉴定管中，放入37℃恒温箱中作用24h与48h分别进行观察，根据生化反应和产生色素不同，可分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌三种（表2），其中金黄色葡萄球菌多为致病菌，表皮葡萄球菌偶尔致病，腐生葡萄球菌一般不致病;多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、产酸不产气;多数致病性菌株能分解甘露醇、液化明胶和产生血浆凝固酶;过氧化氢酶阳性，可与链球菌相区分。

5 防治措施

5.1 管理

检查笼具及相关工具，不可有尖锐物体。保持鸡舍通风干燥，地面平养要防止垫料潮湿、保持清洁。合理安排饲养密度，光照应当强弱适中，适时断喙，防止相互啄羽、啄肛，转群时注意轻拿轻放，合理安排饲养密度，科学制定空舍时间，消除一切感染隐患。

5.2 营养

提供营养全价平衡的饲料，特别注意补充维生素和无机盐，防止维生素、矿物质缺乏导致发育受阻、皮炎、干裂和瘫痪;疾病感染期间饲料中VA加倍使用。

5.3 防止继发感染

做好滑液囊支原体、鸡痘、传染性贫血、病毒性关节炎的防控工作，减少葡萄球菌并发、继发感染。

5.4 清洁与消毒

孵化过程严格执行清洁消毒制度，发病鸡与带菌鸡是主要传染源，应隔离发病鸡并对鸡舍、用具等使用0.3%的过氧乙酸进行消毒，消毒药/液应交替使用。

5.5 药敏试验

减少抗生素的滥用，对发病鸡采取早发现、早隔离、早治疗，同时大群做好相关预防措施，选择治疗革兰氏阳性菌药物进行药敏试验，截至目前实验室统计敏感药物依次为磷霉素、头孢哌酮、头孢噻肟;当发生葡萄球菌性眼炎时，可根据药敏结果进行局部治疗。

5.6 免疫

药物防治效果不理想时，可在雏鸡20日龄使用葡萄球菌灭活苗进行免疫接种。

5.7 结语

葡萄球菌为相对于有代表性的细菌性疾病，菌苗、药物都具有一定的防治效果，耐药菌株的形成影响药物治疗效果，而且抗生素使用受限;在此情形下建议首先要做好生物安全，养殖场内应严格把控环境卫生，葡萄球菌仍需以预防为主。