杨梦瑶 ，吴雨晴 ，刘辰辰 ，郭 宇，刘俊伟

(1. 天津国际生物医药联合研究院 天津 300457；2. 南开大学药学院 天津 300350)

有研究表明快速生长的组织一般都有活性的多胺合成体系，尤其是肿瘤的快速生长亦有赖于多胺含量的显着增长[1]。作为精胺的二乙酰化衍生物，N1,N12-二乙酰精胺(N1,N12-diacetylspermine，DiAcSpm)对于非小细胞肺癌患者，尤其是Ia临床阶段患者的灵敏度比其他肿瘤标志物都要高[2]，并且尿液中的DiAcSpm可作为生存率的独立预后因素[3-4]。图1为N1,N12-二乙酰精胺的化学结构式。在不同临床阶段，DiAcSpm对结肠癌检测的灵敏度也高于CEA和CA19-9[5]。同时，因为不同个体之间N1,N12-二乙酰精胺的尿液含量差别较小，所以通过DiAcSpm含量变化来检测癌症的发生相对于总多胺或其他多胺类化合物而言准确率较高[6-8]。

但是由于DiAcSpm缺乏伯氨基，再加上其在尿液中的含量低于0.5%，以常规的仪器分析手段无法满足检测需求，需用GC-MS、HPLC-MS以及MSICE-MS/MS[9-10]等高灵敏度检测仪器。这些仪器检测用时长、价格昂贵，无法满足临床上的日常检测[11]。本研究以N1-乙酰精胺为半抗原，通过与载体蛋白偶联制备出N1,N12-二乙酰精胺人工抗原，通过免疫动物获得抗DiAcSpm特异性抗体，结合化学发光免疫分析法建立了可用于人体尿液样本中N1,N12-二乙酰精胺的快速检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

N1-乙酰精胺(美国Cayman Chemical公司)；N1,N12-二乙酰精胺(美国Quality Control Chemicals公司)；戊二醛(50%)、牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、脱脂奶粉、Triton X-100、吐温-20(上海生工生物工程有限公司)；明胶(苏州亚科科技股份有限公司)；鱼皮胶(德国Sigma-Aldrich 公司)；弗氏佐剂(德国Sigma-Aldrich 公司)；化学发光底物(湖州英创生物科技公司)；……