秦义娴，刘 丹，邓 永，高金源，苏 佳，朱 真，吴华伟

(中国兽医药品监察所，北京100081)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的猪的一种以母猪繁殖障碍及仔猪出现严重呼吸道症状的疾病[1]。该病毒于1991年由荷兰学者首先分离报道[2]。我国于1996年首次分离出病原[3]，并在2006年爆发了由 PRRSV经典毒株突变株引起的高致病性猪繁殖与呼吸综合征，2012年以来PRRSV NADC30-like毒株已逐步成为我国的PRRSV优势流行毒株。

精准诊断是防控PRRS的基础。国内外已建立了许多可鉴别诊断PRRSV NADC30-like毒株的检测试剂，绝大多数为RT-PCR方法[4]，但尚未有可特异性用于PRRSV NADC30-like毒株鉴定用单克隆抗体的报道。GP5蛋白作为PRRSV毒的主要糖基化结构蛋白，可诱导机体产生中和抗体，常用于单克隆抗体制备和诊断试剂研制的靶标。本研究以原核表达纯化的GP5蛋白[5]作为抗原免疫小鼠，通过间接免疫荧光筛选，获得1株针对PRRSV NADC30-like毒株GP5蛋白的单克隆抗体，为PRRSV NADC30-like诊断试剂的研制提供了坚实基础。

1 材料与方法

1.1 细胞、毒株、GP5蛋白及实验动物 SP2/0细胞、Marc-145细胞、PRRSV 46D(NADC30-like毒株)、PRRSV 30D(NADC30-like毒株)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型 (PCV2)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)，由中国兽医药品监察所保存；PRRSV CH-1R株、TJM-F92株、HuN4-F112株、GDr180株、R98株、JXA1-R株均为商品化疫苗；GP5蛋白由中国兽医药品监察所制备保存；8周龄Balb/c雌性小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2 主要试剂 Protein Marker购于TaKaRa公司； SDS-PAGE凝胶制备试剂盒购于碧云天生物技术有限公司； HRP标记的羊抗鼠IgG为Invitrogen公司产品；FITC标记的山羊抗小鼠IgG为Sigma公司产品；Mouse单克隆抗体亚型鉴定试剂盒为proteintech公司产品；QuickAntibody-Mouse3 W佐剂为北京博奥龙免疫技术有限公司产品。……