正清风痛宁缓释片通过调控HOTAIRM1/miR-137 轴影响人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的机制研究①
2021-11-25盛雪鹤解雪峰安徽医科大学药学院合肥230032
盛雪鹤 解雪峰 (安徽医科大学药学院,合肥230032)
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一类以滑膜炎症和关节破坏为特征的自身免疫性疾病,其病理特点主要表现为滑膜细胞“肿瘤样”增殖和炎症[1-2]。成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovio‐cytes,FLS)是关节滑膜细胞中的主要效应细胞,在RA 的滑膜炎症和关节破坏中起重要作用,其凋亡不足与RA 滑膜增生密切相关[3]。正清风痛宁缓释片是临床常用的治疗RA 的药物,疗效显著,但其治疗RA 的具体机制尚未明确[4]。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和微小 RNA(mi‐croRNA,miRNA)是两类小分子非编码RNA,参与调控细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为,是免疫性疾病、肿瘤等疾病治疗的潜在靶点[5-6]。研究还表明,lncRNA 与miRNA 存在相互作用,两者共同参与疾病的发生发展[7]。HOXA 转录本反义RNA1(HO‐TAIRM1)是一种lncRNA,有报道称,其在RA患者外周血淋巴细胞中表达升高,但还未见其影响FLS 凋亡的相关报道[8]。生物信息学软件预测显示,HO‐TAIRM1 与miR-137 的核苷酸序列存在连续结合位点,miR-137 可能是HOTAIRM1 的靶基因。研究显示,miR-137 在 FLS 中呈低表达,过表达 miR-137 可降低FLS 的增殖、迁移和侵袭及炎症细胞因子的表达,可能是骨关节炎的治疗靶点[9]。因此,本研究以HOTAIRM1/miR-137 轴为切入点,观察正清风痛宁缓释片对FLS 凋亡的影响,初步探讨其治疗RA 的机制。
1 材料与方法
1.1 材料 胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、DMEM 培养基、细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、胰蛋白酶、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白检测试剂盒、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)细胞凋亡试剂盒和双荧光素酶活性检测试剂盒均购自北京索莱宝科技有限公司,Lipofectami‐neTM2000 试剂盒购自美国 Invitrogen 公司,Trizol 试剂、逆转录试剂盒和……
