游红琴 王小昆 徐本玲 李铁鹏 秦 鹏 刘 雪 张梦雨 王 瑶 陈广玉 高全立

（郑州大学附属肿瘤医院，河南省肿瘤医院，郑州450008）

γδ T 细胞占外周血CD3+T 细胞的 5%~10%，可被磷酸抗原迅速活化，表达分化抗原簇（cluster of differentiation，CD）69 和 CD25，通过分泌颗粒酶、穿孔素及IFN-γ发挥抗肿瘤作用［1-2］。在体外经磷酸小分子抗原扩增的γδ T 细胞被广泛用于肿瘤患者的过继治疗［3］。唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15（sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin 15，Siglec-15）是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素家族成员，最近的研究发现，Siglec-15 可通过抑制CD4+和CD8+T细胞的增殖及IFN-γ的分泌，直接抑制特异性T 细胞的抗肿瘤免疫应答［4］。但 Siglec-15 对抗原特异性γδ T 细胞的影响尚未见报道，本研究旨在明确Siglec-15 对γδ T 细胞活化、增殖和分泌效应分子的影响，以期为γδ T细胞的临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料 肺癌血液标本为2019年12月至2020年4月河南省肿瘤医院免疫治疗科GMP实验室的临床检测标本，其中男性6例，女性7例。唑来膦酸（zole‐dronic acid，ZOL）购自扬子江药业集团；IL-2 购自山东泉港药业有限公司；淋巴细胞分离液购自美国GE公 司 ；流 式 抗 体 BV510-TCRγδ、FITC-CD3、PECD69、APC-CD3、APC-CD25、PE-颗粒酶 B 和 APCIFN-γ 及同型对照抗体购自美国Biolegend 公司；羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（carboxyfluoresce‐in diacetate succinimidyl ester，CFSE）购自美国Ther‐mo Fisher 公司；Fortessa 流式细胞分析仪和FlowJo V10流式分析软件购于美国BD公司。

1.2 方法

1.2.1 γδ T 细胞的体外培养 空腹抽取外周静脉血 3 ml 于 EDTA 采血管，离心 10 min（2 000/r min，离心半径10 cm），取离心后的自体血浆备用。全血细胞经生理盐水1∶1稀释后使用淋巴细胞分离液离心20 min（2 000/r min，离心半径10 cm）吸取白膜层。用无血清培养基重悬细胞，离心10 min（1 500/r min，离心半径10 cm）去除血小板。再次以无血清培养基重悬细胞，离心8 min（1 200/r min，离心半径10 cm）获取外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）。……