余慧君 彭 晖

青葙皂苷（Celosins，CES）是中药青葙子的主要有效成分，其化合物类别为五环三萜皂苷类，共9类，其中CESⅠ、Ⅱ是其发挥药理作用的主要成分。研究发现，CES 具有抗肿瘤、降血脂、降血糖的作用[1-2]。然而，目前关于CES 对心肌细胞保护作用及机制的研究较少。氧化应激与心肌肥厚、心力衰竭、缺血性心脏病及原发性高血压等的发病机制有关，在这些病理过程中产生活性氧（reactive oxygen species，ROS）[3]。ROS 过度积累，造成氧化应激。作为活跃的高耗氧量的器官，心脏易受到氧化应激，导致细胞坏死及凋亡[4-5]。抗氧化Nrf2/ARE 信号通路既能平衡细胞内氧化还原状态，还能诱导细胞内的抗氧化酶清除多余的ROS[6]。有报道表明，Nrf2/ARE 信号通路调控细胞氧化应激过程，与动脉粥样硬化形成密切相关，在心血管疾病中发挥重要作用[7-8]。本研究应用H2O2诱导H9c2 心肌细胞损伤模型，探讨CES 对抗心肌细胞氧化应激损伤的作用机制。

1 实验材料

1.1 细胞株 大鼠心肌细胞H9c2（批号RDCL-012）购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

1.2 试剂及仪器 噻唑蓝（MTT）（上海源叶生物科技有限公司，批号S19063），高糖培养基（DMEM 培养基）及胎牛血清FBS（美国Gibco 公司，批号12800017、10270106），细胞核蛋白提取试剂盒，RIPA蛋白裂解液，ECL 化学发光试剂盒（碧云天生物技术公司，批号分别为P0027、P0012S、P0015C、P0018FS），ROS 测定试剂盒[翌圣生物科技（上海）有限公司，批号50101ES01]，Western blot 一抗均为兔抗，包括含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3，9 剪切体（cleaved caspase-3，cleaved caspase-9）、血红素氧合酶1（HO-1）、核因子E2 相关因子（Nrf2）、β 肌动蛋白（β-actin）、组蛋白H3（Histone H3）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）（美国abcam 公司，批号分别为ab32539、ab32351、ab32124、ab137550、ab68477、ab5694、ab1791），Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（大连美仑生物技术有限公司，批号MA0220）。……