刘 存，吕桂霞，徐 鸿，党安坤，梁 琳，陈 静，孙圣福*，兰邹然*

(1.山东省动物疫病预防与控制中心，济南 250100；2.东营市现代畜牧业发展服务中心，东营 257091；3.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193)

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)，又称牛疙瘩皮肤病，是OIE须通报动物疫病名录中一种牛的重要传染病[1-2]。该病以皮肤结节病变为典型特征，发病率为3%～85%，通常死亡率为1%～5%，是严重威胁养牛业健康可持续发展的疾病之一[2-4]。2015年以后，我国周边哈萨克斯坦、俄罗斯等国家LSD疫情频繁发生，这使LSD输入我国的风险增大[5]。2019年，我国首次确诊LSD疫情，在福建、江西、广东、安徽、浙江等省也相继发现了LSD疫情，但我国快速、及时采取综合防控措施，及时阻断了LSD继续蔓延[2, 6-7]。

2020年11月初，山东滨州及东营报告可疑LSD疫情，后经山东省动物疫病预防与控制中心、中国动物卫生与流行病学中心进行病原学诊断，最终确诊该起疫情为LSD疫情。此次LSD疫情是山东省首次确诊境外输入LSD疫情。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

MagNA Pure 96 DNA and Viral NA Small Volume Kit为Roche 产品；LSDV荧光PCR检测试剂盒Biovet产品；核酸提取仪、荧光定量PCR仪均为Roche产品。

1.2 引物设计

参照LSDV GCPR基因序列(MN598006)，以Primer Premier5.0软件设计引物，GCPR-F：5′-ATGAATTATACTCTTAGACAGTT-3′，GCPR-R：5′-AACAATGACATAGAGACACAATTTC-3′。

1.3 样品采集

滨州共采集71份样本，包括54份牛抗凝全血和17份皮痂组织。东营共采集273份样本，包括144份牛抗凝全血和129份皮痂。

1.4 DNA提取

皮痂样本使用组织匀浆机对进行匀浆。分别取 200 μL 皮痂组织匀浆液、牛抗凝全血，利用Roche核酸提取仪提取DNA。

1.5 荧光定量PCR方法检测

以“1.4”所提取DNA为模板，参照牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus，LSDV)荧光定量PCR检测试剂盒说明书进行检测。……