林 童，郭徐静，武敬宇，熊勇华，郭 亮

(南昌大学中德联合研究院，江西 南昌 330047)

基于纳米材料的免疫检测探针因优异的信号输出能力在分析测试领域已被广泛应用[1-3]。充分暴露纳米材料表面抗体的抗原结合区Fab片段有利于免疫探针捕获抗原，提高免疫检测性能。目前，在纳米粒子表面固定抗体的方法有物理吸附法、共价偶联法和生物亲和法等。其中，物理吸附法[4-5]相对简单。但是使用该方法制备的抗体-纳米颗粒复合物不稳定，重复性差，且抗体在纳米粒子表面无法定向。生物亲和法是通过亲和素-生物素系统或抗体结合蛋白介导的偶联方式。其偶联产物的稳定性虽优于物理吸附，但所用蛋白价格昂贵。共价偶联法可形成稳定的抗体-纳米颗粒复合物，有效避免抗体在检测及储存过程中脱落，且无需使用额外的结合蛋白。利用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)活化羧基使纳米粒子与抗体间通过酰胺键连接是最为常用的共价偶联方法[6-7]。然而由于抗体中广泛分布氨基和羧基，使抗体与纳米材料的结合不是位点特异性的，导致抗体在纳米粒子表面仍是随机取向。由于无法充分暴露Fab片段，该方法制备的复合物表面的有效抗体数不足4%[8]。同时，通过酰胺键连接抗体还可能导致抗体自交联，由此形成的多层抗体可产生空间位阻效应，使抗体的抗原结合能力进一步降低。IgG是一种糖基化蛋白，其恒定区Fc片段具有寡糖链。因此通过氧化Fc片段上的碳水化合物可获得醛基[9]，从而可与氨基修饰的纳米粒子实现位点特异性的共价偶联。……