周 琦，明 强，刘 敏，骆春艳

（1.武汉科技大学附属天佑医院，武汉 430064；2.上海市第十人民医院，上海 200072）

心血管疾病严重威胁人类生命健康，常导致心肌细胞发生死亡，造成功能性心肌细胞缺失，进而导致心力衰竭［1］。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem sells，BMSCs）是骨髓中最丰富的细胞，存在于机体结缔组织和器官基质中，具有多向分化潜能和自我更新能力［2-3］。研究发现，间充质干细胞具有分化为心肌细胞的能力，可用于修复缺血性心脏病［4］。因此，诱导BMSCs 向心肌细胞分化，为现代心血管系统疾病的临床治疗提供了新方向。实验证明5-氮胞苷（5-azacytidine，5-aza）可有效诱导BMSCs 分化为心肌样细胞［5-6］。

研究显示，多种微小RNA（micro RNA，miR）可提高BMSCs 分化为心肌细胞的效率［7-8］。miR-19b 在多种生物的胚胎心脏中均有表达，在心脏发育中发挥重要作用，在心肌细胞发育晚期具有维持细胞增殖，抑制凋亡的作用［9］。但关于miR-19b诱导BMSCs 分化为心肌细胞的相关报道较少，本研究将重点探讨miR-19b 的表达对BMSCs 向心肌样细胞分化过程的影响。

1 材料和方法

1.1 实验动物

4 周龄清洁级SD 雄性大鼠，10 只，100 g，购自湖北省疾病预防控制中心，动物合格证号：NO.42000600029522。

1.2 主要材料与仪器

L-DMEM 购自Hyclone 公司；胎牛血清、Opti-MEM 购自Gibco 公司；CD44、CD34 抗体购自eBio⁃science 公司；CD105 抗体购自Abcam 公司；CD90抗体购自BD公司；Trizol购自Ambion公司；逆转录试剂盒购自TaKaRa 公司；SYBR Green 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒购自KAPA Biosystems公司；噻唑蓝（MTT）、三甲基亚砜（DMSO）、5-aza购买自Sigma-Aldrich 公司；聚偏二氟乙烯膜（PVDF 膜）、化学发光试剂购自Millipore 公司；兔抗心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）、兔抗心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）、兔抗心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T，cTnT）购自Abcam 公司；miR-19b mimics/inhibitor 由锐博生物科技有限公司合成；……