肖洒 邓晓东 贺常皓 李亚军 费小雯*

（1.海南医学院 基础医学与生命科学学院，海南 海口 571199；2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南 海口 571101）

RNAi（RNA interference）技术是一项基因沉默技术，由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发同源mRNA高效特异性降解的现象，从而阻断特定目的基因的表达，最终影响蛋白质合成。作为一种高效的基因抑制技术，目前在农业抗害虫、作物改良、医学疾病治疗、未知基因功能探究等领域广泛应用。

1 RNA干扰的发现

Guo等在1995年从事RNAi的研究，经研究发现，在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）胚胎生长发育时期，成功地将外源的Part 1基因双链RNA导入体内，可导致线虫该基因表达明显下调［1］，同样Fire等在1998年，研究发现当肌肉注射外源dsRNA于线虫体内，该目的基因的表达明显被抑制［2］。

2 RNA干扰机制

真核生物在RNAi基因沉默过程中包含3种重要的非编码小RNA,即mi RNA（microRNA）、siRNA（small interference RNA）和piRNA（Piwi-interacting RNA）。由siRNA介导的基因沉默过程包含以下部分：（1）首先将人工合成的或与体内相同的dsRNA，与靶基因相同序列的有义RNA和反义RNA结合，然后经RNaseIII家族特异性Dicer酶识别，切割成21～23nt siRNA，当R2D2蛋白和Dicer酶形成异源二聚体，紧接着与siRNA结合形成RISC装载复合物，然后AGO蛋白与Dicer交换，结合到siRNA的一端，再与R2D2替换，将整个siRNA转载到AGO蛋白中，形成有活性的沉默复合物（RNA-induced silencing complex），由于AGO蛋白含有PAZ、MID、PIWI三个重要功能结构域，siRNA引导链的5’端与MID结合，与3’端露出的两个核苷酸与其PAZ结合，通常siR⁃NA的第28个核苷酸与靶mRNA特异性配对，长约10个核苷酸的mRNA一般切割在第9、10个核苷酸上，由PIWI催化将靶mRNA切断，使其离开RISC，再通过胞外切酶进一步降解mRNA。（2）siRNA对基因沉默，包括转……