李恬静薇 邹潇潇 朱军 鲍时翔

（1. 河北农业大学海洋学院，秦皇岛 066000；2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海南省海洋生物资源功能性成分研究与利用重点实验室，海口 571101）

荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，RT-qPCR）是一种能够实时监测PCR产物扩增并对其进行简单的分析的方法，通过在反应体系中加入荧光物质，监测PCR过程中的荧光信号强度来进行分析。RT-qPCR具有灵敏度高，特异性强、重复性好、操作简单便捷等优点［1-2］。RT-qPCR被广泛应用于基因表达研究中，然而RT-qPCR的准确性受到许多因素的影响，包括RNA样本质量和提取方法的差异，以及反转录和PCR的效率［3-5］，所得的结果需要进行校准后才具有生物学意义。

最常用的RT-qPCR校准方法是使用一个或多个内参基因。内参基因作为参照的基因在各组织细胞中稳定表达，在研究基因的表达水平中常被用作数据的校准，以消除RT-qPCR不同样品的差距和RT-qPCR操作中的误差。最普遍使用的内参基因为内源性参照基因，也叫看家基因（持家基因），在生物体各细胞组织中都能表达，其表达产物是维持细胞生命活动必须的蛋白质，如肌动蛋白（Actin）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、微管蛋白基因（Tubulin）和核糖体蛋白（18S）等。但近年来越来越多的研究发现，这些常用内参基因在不同的物种，不同的组织细胞，不同的发育阶段和实验条件都存在较大的表达差异［6-7］。在拟南芥和杂交白杨不同组织中发现几种常用内参基因（TUB、Actin、UBQ和EF1a）的表达大多不稳定，如果使用不适当的内参基因会直接影响RT-qPCR的结果准确性［8］。……