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烟台黑猪SLA-2基因真核表达载体的构建及表达

2021-11-19胡晓王宝宝窦少华姜南付常振金行高凤山

生物技术通报 2021年10期

胡晓 王宝宝 窦少华 姜南 付常振 金行 高凤山

(大连大学生命科学与技术学院,大连 116622)

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)是染色体上由高度多态、紧密连锁的基因座组成的一个遗传区域,编码一系列与免疫应答相关的分子。猪的MHC也叫猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)。SLA由 3个 基因簇组成,分别是SLA I、II、III。其中SLA I类分子主要介导细胞免疫应答。该分子包括重链和轻链[1],轻链只有一个等位基因β2微球蛋白(β2 microglobulin,β2m);重链具有多态性,包括胞内区、跨膜区、胞外区和信号肽4个区域,含有SLA-1、SLA-2和SLA-3三个功能基因[2-3]。其中,SLA-2比SLA-1和SLA-3在信号肽的起始端多3个氨基酸。重链与轻链以非共价键结合构成SLA I类分子,不仅识别内源性抗原肽[4],也可以通过交叉递呈途径识别外源性抗原肽[5]。被识别的多肽与SLA I类分子形成抗原肽-MHC分子复合物(peptide-MHC complex,pMHC)并被递呈到细胞表面,pMHC进一步与CD8+T淋巴细胞表面的T细胞受体(T cell receptor,TCR)结合,激活CD8+T淋巴细胞,使活化的CD8+T淋巴细胞转化为有细胞毒性的T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),发挥毒性作用并对靶细胞造成杀伤,启动机体的细胞免疫应答[6]。不同的SLA I类分子递呈的抗原肽不同,根据抗原递呈机理,可建立不同SLA I类分子表位递呈规律的研究平台。

烟台黑猪是我国优良的地方猪种之一,基因资源十分宝贵[7-8]。本课题组已经克隆了烟台黑猪SLA-2基因,并构建了该基因的原核表达载体,进行了原核表达研究[9]。然而,烟台黑猪SLA-2基因的真核表达研究尚未开展,其表位递呈规律研究平台也尚未建立。本研究拟以烟台黑猪SLA-2-YT/pMD 18-T全基因为材料,构建SLA-2-YT编码区基因的真核表达载体,并使其在sT2细胞系中优势表达,为探究烟台黑猪SLA-2-YT基因的抗原表位递呈规律等奠定基础。……

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