于 卓，陈 明，刘子洋，张佩青

(黑龙江省中医药科学院·黑龙江 哈尔滨 150036)

在全球范围内，慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)发病率呈快速增长趋势，而且其预后差，医疗费用昂贵。CKD的高患病率和高病死率，增加了诱发心血管疾病及神经系统疾病的危险性，使之成为世界性的公共健康问题。目前国内外对CKD尚无明确治愈的方法，最终需要肾脏替代治疗，因此给整个社会及家庭带来了沉重的经济负担，迫使CKD患者积极寻求内科治疗。由此寻找早期CKD的诊断手段，延缓CKD的发展、推迟肾脏替代治疗时间的有效方法则显得尤为关键，值得医学工作者进一步探讨研究。苏黄泻浊丸为国医大师张琪教授经临床经验方，该方芳香化浊、苦寒泄热，能够改善肾功能、延缓慢性肾脏病3、4期进展[1]。前期实验研究证实苏黄泻浊丸能够通过减少肾组织TGF-β1/p38MAPK和ILK、PINCH-1蛋白在肾间质和肾小管的表达，延缓肾纤维化进程[2-3]。本课题通过观察苏黄泻浊丸对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠可溶性CD146表达的影响，探讨苏黄泻浊丸抗肾间质纤维化其他作用机理，报道如下。

1 实验材料

1.1 药物 苏黄泻浊丸：黑龙江省中医药科学院生产，批号：黑药制字 Z20090018，配成生药浓度4 g/kg。尿毒清颗粒：由康臣药业(内蒙古)有限责任公司提供，批号：20140437，生药浓度4 g/kg。

1.2 动物 70只成年清洁级雄性Wistar大鼠，体质量180～210 g，哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心提供,生产许可证号：SCXK(黑)2006-010，于哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心适应性饲养1周。

1.3 试剂 可溶性CD146 ELISA试剂盒：上海乔羽生物专业提供；大鼠血肌酐、尿素氮试剂盒：北京中生北控公司提供；大鼠尿微量蛋白试剂盒：北京中生北控公司提供。

1.4 仪器 日本Hitachi Limited公司全自动生化分析仪；德国蔡司光学显微镜.

2 方法

2.1 模型制备及分组给药 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组及苏黄泻浊丸组，每组14只。采用大鼠单侧输尿管梗阻方法(UUO)制备肾间质纤维化模型[4]，并于术前禁食12 h，术后单笼饲养。术后第2天模型组死亡1只，假手术组麻醉过量死亡1只，其余大鼠术后恢复良好，基本行为无异常。按70 kg成人等效剂量尿毒清组予尿毒清1.81g/(kg·d)、苏黄泻浊丸组予苏黄泻浊丸1.58 g/(kg·d)灌胃，正常组、假手术组、模型组予等体积生理盐水灌胃。从术后第1天开始给药，每天上午灌胃1次，连续28 d。

2.2 观察指标及测定方法

2.2.1 血、尿生化指标测定 造模第28天全自动生化仪检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白。

2.2.2 血、尿sCD146测定 ELISA法测定，均根据试剂盒说明书进行测定。

2.2.3 肾组织病理学变化观察 造模第28天处死大鼠，摘取肾脏。经石蜡包埋后，切片、清洗、蒸馏水浸、冲洗等制备标本，显微镜下观察。

3 结果

3.1 各组大鼠血清肌酐、尿素氮、尿微量白蛋白检测结果 见表1。

表1 各组大鼠血清肌酐、尿素氮与尿微量白蛋白水平的比较

3.2 各组大鼠血、尿sCD146检测结果 见表2。

表2 各组大鼠血、尿sCD146水平比较

3.3 各组大鼠肾组织病理学观察 正常组大鼠肾组织未见异常。假手术组大鼠肾组织无显著性变化，皮、髓质分界较清，未见纤维化改变及肾小管处结晶沉积。模型组可见肾小球结构基本正常，但肾间质有水肿，肾脏皮质变薄，小管扩张，有管型生成，间质纤维化变显著，纤维细胞和胶原纤维明显增多，炎症细胞浸润，皮髓质不清。尿毒清颗粒组和苏黄泻浊丸组肾小管、间质病理学改变较模型组病变程度明显减轻。见图1。

图1 各组大鼠肾组织病理变化(HE，×400)

4 讨论

肾间质纤维化病因在传统中医学古代文献中并没有独立记载，总结概括其原因大多为各种肾脏病日久迁延不愈，脏腑功能失调，复感外邪、情志不遂、劳逸失调等因素加重病情，最终发展成为“正虚邪实”之病证。先天禀赋不足、劳逸失调、情志不遂、饮食所伤、失治误治等为内因，外因主要是外感六淫伤肾，其多为急性肾脏病的病因，但大多时候诱发慢性肾脏病急性发作，引起慢性肾损害。此外，他脏及肾亦可发为慢性肾间质纤维化。

苏黄泻浊丸为国医大师张琪教授经数十年临床经验总结所得，用于治疗慢性肾衰竭湿邪内蕴，脾胃湿热证，多用于慢性肾功能衰竭中、晚期，经长期临床应用，疗效良好[5]。本实验结果可见苏黄泻浊组大鼠血肌酐、血尿素氮水平、尿微量白蛋白明显低于模型组，效果优于尿毒清组，证明该药物能够明显延缓UUO模型大鼠肾间质纤维化进展。

CD146是近些年发现的一种细胞黏附分子，是反映细胞内皮功能的生物标志物[6]。CD146在介导细胞间黏附，调节细胞渗透性，促进内皮细胞增殖以及参与细胞跨膜信号传导等方面有着重要的作用[7-8]。可溶性CD146(sCD146)是CD146的可溶性形式,Bardin等[9]发现在慢性肾衰竭患者外周血及尿液中sCD146的表达异常增高，进一步表明CD146与肾小球内皮细胞损伤的关系。外周血sCD146水平与肾功能及机体炎症状态密切相关，能较好地反映患者肾功能损伤、进展及严重程度[10-11]。本文检测结果显示模型组大鼠血、尿sCD146水平较正常组明显升高，苏黄泻浊丸组和尿毒清组血、尿sCD146水平明显降低，28 d时血sCD146苏黄泻浊丸组优于尿毒清组(P<0.05)。

综上所述，苏黄泻浊丸能够改善UUO模型大鼠的肾功能；减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化，通过影响内皮细胞相关细胞因子、受体及黏附分子表达，抑制局部炎症反应可能是其部分作用机制。