陆淼炯，褚卫建

(杭州市中医院·浙江 杭州 310007)

近年来，我国大肠癌的发病率持续上升，现已高居恶性肿瘤第3位[1]，死亡率位居恶性肿瘤第5位[2]。在大肠癌的治疗中化疗占重要地位，研究发现，化疗抵抗性的形成是导致化疗疗效下降的主要原因，但是具体的形成机制还不完全清楚[3-4]。5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil, 5-FU)作为一种抗代谢的化疗药物，能有效地降低淋巴结阳性的大肠癌患者的死亡率[5]，然而其耐药问题仍然是其应用过程中的主要障碍[6]。因此，寻找低毒高效的药物对现有的化疗药物逆转耐药是肿瘤领域研究的热点和难点。魔芋葡甘露聚糖(KGM)是中药蛇六谷的主要成分，其抗肿瘤、化疗增敏等药理作用已成为研究的热点之一[7]，然而目前有关KGM对逆转大肠癌5-FU耐药的作用及机制尚未明确。研究表明，激活内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)是逆转肿瘤耐药的重要途径之一[8]。因此，本研究通过构建HCT-8/5-FU耐药细胞模型，探究KGM通过ERS逆转大肠癌耐药作用，并进一步阐明其作用机制。

1 材料

1.1 细胞 人大肠癌细胞HCT-8购买于中国科学院上海细胞库。

1.2 药物与试剂 5-FU：美国Sigma公司，批号：04541；魔芋葡甘露聚糖(KGM，纯度≥98%)：合肥博美生物科技有限公司，批号：180306。噻唑蓝(MTT)：美国Sigma公司；DMEM培养液、胎牛血清：美国Hyclone公司；Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒：美国BD公司；RIPA裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒：上海碧云天公司；抗体(cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2、PERK、elf2α、p-elf2α、ATF4、CHOP、GAPDH)：美国CST公司；ECL显影液：美国BIO-RAD公司。

1.3 仪器 3001型全自动酶标仪：美国Thermo公司；TY-80B型转移脱色摇床：南京普阳科学仪器研究所；PowerPac Basic电泳仪：美国BIO-RAD公司；3300 Mini化学发光成像系统：中国CLinX公司；……