刘明盛 张勇

(1成都市第五人民医院妇产科，四川 泸州 611130；2西南医科大学附属医院妇产科)

卵巢癌是女性常见的生殖系统恶性肿瘤之一。卵巢癌的病理类型较多，临床上以上皮细胞来源的浆液性卵巢癌最为常见〔1〕。长链非编码RNA(LncRNA)是一种长度大于200 bp，但不具有编码蛋白质功能的RNA〔2〕。LncRNA的异常表达与卵巢癌发生及发展密切相关，且其机制多为负向调控了某种抑癌微小RNA(miRNA)的表达。例如，LncRNA NEAT1在卵巢癌中呈高表达且这部分患者预后较差〔3〕，分子研究证实LncRNA NEAT1通过下调miR-194的表达进而促进EMT转录因子ZEB1的表达而促进肿瘤EMT转化和侵袭转移〔4〕；经典的促癌性PI3K/AKT通路则可以被LncRNA MALAT1负性调节，进而逆转卵巢癌细胞多重耐药表型〔5〕。LncRNA MIAT是近年来鉴定出的一种新的LncRNA，本研究旨在探索LncRNA MIAT对卵巢癌侵袭的影响，以期对LncRNA MIAT成为卵巢癌分子治疗靶标提供理论依据。

1 材料和方法

1.1组织标本 本研究选取2014年1月至2015年1月成都市第五人民医院50例卵巢癌与对应癌旁组织。

1.2细胞来源及主要试剂 SKOV3细胞由我科实验室保存；LncRNA MIAT siRNA及阴性对照siRNA由美国Santa Cruz公司设计并合成；miR-150(MQPS0000665-1)及U6(MQP-0201)引物购自广州锐博生物科技有限公司；IGFBP1引物(上游5′-TCACAGCAGACAGTGTGAGAC-3′；下游5′-CCCAG GGATCCTCTTCCCAT-3′)，GAPDH引物(上游5′-AAGCCTGCCGGTGACTAAC-3′；下游5′-GCGCCCA ATACGACCAAATC-3′)、Trizol试剂(15596-026)、RT-PCR试剂盒、qPCR试剂盒及转染试剂Lipofectamine 2000(11668-027)均购自美国Invitrogen公司；Transwell小室购自美国康宁公司，兔抗人IGFBP1单克隆抗体(#31025)及兔抗人GAPDH单克隆抗体(#5174)均购自美国CST公司；胎牛血清(FBS)购自Gibco公司；DMEM液体细胞培养基购自Mediatech公司；基质胶购自美国BD公司。

1.3qRT-PCR 标本及细胞RNA由Trizol试剂提取。反转录PCR条件设定为：50℃ 30 min，94℃ 2 min，循环次数1；94℃ 15 s，60℃ 30 s，68℃ 3 min，循环40次；72℃ 10 min。通过2-△△Ct法以GAPDH为内参计算LncRNA MIAT及IGFBP1 mRNA的相对表达量；……