郑佳林 郭丽璇 金惠英 吴静

(成都中医药大学附属医院检验科，四川 成都 610075)

阿尔茨海默病(AD)是最常见的神经退行性疾病，研究表明抑制神经元的炎症反应和凋亡是AD的潜在治疗靶点〔1,2〕。目前已有研究发现，miRNA在AD患者的外周血中失调，可作为AD的候选生物标志物〔3,4〕。miR-105-5p在帕金森病患者及神经疾病患者血浆中异常上调，可作为帕金森病的潜在生物标志物〔5〕。然而，关于miR-105-5p在AD中的作用及下游机制未见研究。本研究旨在分析miR-105-5p对AD体外模型细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响，并进一步识别miR-105-5p的作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂与仪器 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12购自美国典型物保藏中心；10%胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基、胰蛋白酶、Lipofectamin2000、TRIzol试剂购自美国Thermo Fisher公司；逆转录试剂盒购自TaKaRa公司；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒、RIPA裂解液、CCK-8试剂盒购自中国碧云天公司；miR-105-5p模拟物(miR-105-5p mimic)及阴性对照(NC mimic)、miR-105-5p抑制剂(miR-105-5p inhibitor)及阴性对照(NC inhibitor)、THBS1过表达质粒(pc-THBS1)及阴性对照(pc-NC)均购自上海吉满生物科技有限公司；Renilla-GloTM萤光素酶检测系统购自美国Promega公司；anti-THBS1、anti-GAPDH及辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗购自上海艾博抗公司；MCO-18AC细胞培养箱均购自日本Panasonic公司；ABI-7300型荧光定量PCR仪均购自美国ABI公司；ST-360型全自动酶标仪购自上海科华医疗设备有限公司；DYCZ-25D型蛋白电泳仪购自北京六一生物科技有限公司。

1.2细胞培养与分组 将PC12细胞培养于含10% FBS的RPMI-1640培养基中，并添加100 U/ml的青霉素连续培养至对数生长期。将对数生长期的PC12细胞使用胰蛋白酶消化并离心重悬，调整细胞密度为1×105/ml，接种于96孔板中培养至80%汇合。将PC12细胞……