杨颖 汪锐 成薇婷

(武汉市第一医院肿瘤科一病区，湖北 武汉 430000)

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的癌症之一，每年大约180万人被诊断为肺癌，160万人死于肺癌，患者5年生存期为4%～17%〔1〕。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85%，靶向治疗是其主要的治疗方式，但患者逐渐显现的耐药性是临床治疗的主要障碍〔2〕。研究肺癌发展的分子机制，为其提供新的治疗靶点或抑制剂可有效改善患者生存期。研究表明，铜代谢MURR1结构域(COMMD)8在NSCLC中高表达，参与LINC00657靶向miR-26b-5p/COMMD8信号通路，可促进NSCLC的进展〔3〕，但其具体作用机制尚未明确。COMMD8在肝癌中也表达上调，促进肝癌细胞的增殖和侵袭〔4〕。本课题以肺癌细胞H1299为主要研究对象，假设转染si-COMMD8可抑制肺癌增殖、迁移和侵袭和促进凋亡，增强其顺铂敏感性，并对此假设进行验证，以期为肺癌治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1材料 人正常肺上皮细胞株BEAS-2B和人肺癌细胞株H1299、SPC-A-1、H446购自ATCC；胎牛血清(FBS)购自美国Hyclone公司；DMEM高糖培养基和RPMI-1640培养基购自美国Gibco公司；PI3K/Akt信号通路通路激动剂胰岛素样生长因子(IGF)-1(HPLC≥98%)购自上海联硕生物科技有限公司；顺铂(DDP)购自上海源叶生物科技有限公司，胰蛋白酶购自美国Sigma-Aldrich公司；COMMD8 RNA干扰剂(si-COMMD8)和阴性对照si-con购自上海吉玛制药有限公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；RNA提取试剂Trizol、 实时荧光聚合酶链反应(PCR)试剂盒、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司；COMMD8抗体、Ki-67抗体、基质金属蛋白酶(MMP)-2抗体、多药耐药基因(MDR)1抗体、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3抗体、p-PI3K抗体、p-AKT抗体和β-actin抗体购自英国Abcam公司；……