吴琴燕 梁红芳 张文文 温小林 朱建飞 徐超 庄义庆

摘要：  選择6-磷酸海藻糖（T6P）和海藻糖（Tre）在超高效液相色谱UPLC分离中的最佳色谱柱。对T6P和Tre在C  18 柱、Kinetex Hilic柱、T3柱、LunaNH2柱、Cogent diamond Hydride 柱和BEH Amide 柱6种色谱柱中的色谱行为进行对比研究。结果表明，T6P和Tre在LunaNH2柱和T3柱中分离效果较好，分别建立LunaNH2柱和T3柱的UPLC-MS/MS检测方法，其检出限分别为 1.25～ 5.10  μg/L 和  12.75～ 15.62  μg/L ，定量限分别为 3.75～ 15.60  μg/L 和 38.25～ 52.03  μg/L ，回收率分别为 71.5%～ 85.7%和 82.8%～ 95.6%，相对标准差分别为 3.8%～ 8.5%和 2.7%～ 3.3%，LunaNH2柱的灵敏度高，T3色谱柱的回收率高、稳定性好。2种色谱柱均满足禾谷镰刀菌中T6P和Tre同时检测的要求。

关键词：  超高效液相色谱-串联质谱; 禾谷镰刀菌; 6-磷酸海藻糖; 海藻糖; 色谱柱

中图分类号：  O657.63    文献标识码： A    文章编号：  1000-4440（2021）05-1299-06

Selection of chromatographic column for trehalose-6-phosphate and trehalose detection in  Fusarium graminearum  by UPLC-MS/MS

WU Qin-yan  1 ， LIANG Hong-fang  1 ， ZHANG Wen-wen  2 ， WEN Xiao-lin  1 ， ZHU Jian-fei  1 ， XU Chao  1 ， ZHUANG Yi-qing  1，3

（1.Central Laboratory of Zhenjiang Institute of Agricultural Sciences in Hill Area of Jiangsu Province， Jurong 212009，China; 2.Zhenjiang Agricultural and Rural Bureau， Zhenjiang 212400， China; 3.Central laboratory of Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014， China）

Abstract：   The best chromatographic column of trehalose-6-phosphate （T6P） and trehalose （Tre） in ultra-high performonce liquid chromatography（UPLC） separation was selected. The chromatographic behaviors of T6P and Tre in six kinds of chromatographic columns （C  18  column， Kinetex HILIC column， T3 column， LunaNH2 column， Cogent diamond hydride column and BEH Amide column） were compared. The results showed that Amino column and T3 column were suitable for the detection of T6P and Tre according to the chromatographic retention effect. UPLC-MS/MS methods for T6P and Tre in  Fusarium graminearum  were established based on LunaNH2 column and T3 column， respectively. The detection limits of LunaNH2 column and T3 column were 1.25-5.10  μg/L  and  12.75- 15.62  μg/L ， the limits of quantification were 3.75-15.60  μg/L  and 38.25-52.03  μg/L ， the recoveries were 71.5%-85.7% and 82.8%-95.6%， the relative standard deviations（ RSD ） were 3.8%-8.5% and 2.7%-3.3%， respectively. The method established by LunaNH2 column has high sensitivity， and the method established by T3 column has high recovery rate and good stability. LunaNH2 column and T3 column can be used for the simultaneous detection of T6P and Tre in  Fusarium graminearum.

Key words：  ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）;  Fusarium  graminearum ; trehalose-6-phosphate; trehalose; chromatographic column

禾谷镰刀菌（ Fusarium graminearum ）是小麦、玉米等农作物中最常见的病原菌  [1-5] ，该菌致病，不仅导致农作物产量下降，同时产生呕吐毒素，严重影响农产品的品质和安全性  [6-8] 。海藻糖（Trehalose，Tre）的生物合成途径对真菌的致病力有至关重要的作用，据报道，禾谷镰刀菌中敲除海藻糖合成途径的相关基因，禾谷镰刀菌将丧失海藻糖合成能力，继而无法产生孢子，呕吐毒素合成能力下降86%  [9-10] 。6-磷酸海藻糖（Trehalose-6-phosphate，T6P）是Tre生物合成的中间体，是植物和真菌中必不可少的信号代谢物  [11-14] ，对禾谷镰刀菌中T6P和Tre进行定量检测，可以为禾谷镰刀菌生长和海藻糖合成途径研究提供支撑。

Tre属于糖类化合物，有较为成熟的检测方法。T6P属于酸性强糖，在微生物中含量极低，目前主要采用气质联用（GC-MS）  [10] 和液质联用（LC-MS）  [15-16]  2种方法检测，GC-MS需要衍生反应，前处理复杂，检测时间长，LC-MS检测时间短，样品前处理简单，但主要采用单级杆质谱扫描，母离子定性和定量检测，假阳性概率较大  [17] 。……