孙贺伟， 居 漪， 朱岭峰， 李 卿， 金中凎， 张素洁

（上海市临床检验中心，上海 200126 ）

睾酮是一种类固醇类激素，由胆固醇经一系列酶促反应生成。准确的睾酮检测结果有助于男性性腺功能减退、肿瘤[1-2]和女性多囊卵巢综合征[3]等疾病的诊断。目前，血清睾酮检测多采用免疫学方法。临床常规方法在检测正常男性血清睾酮水平时具有较好的准确性，但在检测女性或儿童血清睾酮水平时并不准确[4]。因此，要想实现血清睾酮检测的标准化就必须建立参考方法。目前，德国临床化学和检验医学学会[5]、比利时根特大学[6]已建立了基于气相色谱质谱的参考方法；美国国家标准和技术研究院（the National Institute of Standards and Technology，NIST）[7]和美国疾病预防控制中心（the Centers for Disease Control and Prevention，CDC）[8]建立了基于液相色谱-串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry，LCMS/MS）的参考方法。在此基础上，本研究拟建立一种基于同位素稀释液相色谱-串联质谱（isotope dilution liquid chromatography tandem mass spectrometry，ID-LC-MS/MS）的精密度、准确度均良好，操作简便的候选参考方法，并对该方法的检测性能进行评价，同时采用该方法对临床常规检测方法（微粒子化学发光法）进行评价。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

LC-MS/MS检测系统由5500 QTRP串联质谱仪（美国SCIEX公司）和Agilent1290UPLC液相色谱系统（美国Agilent公司）组成。Vortex-2涡旋混合器（美国Scientific Industries公司），5424R冷冻高速离心机（德国Eppendorf公司），TS-18824氮吹仪（美国ThermoFisher Scientific公司），Access 2全自动微粒子化学发光免疫分析仪（美国Beckman Coulter公司）及配套睾酮检测试剂（微粒子化学发光法）。睾酮标准品（纯度99%）购自德国Dr. Ehrenstorfer公司；睾酮同位素内标（睾酮-2，3，4-13C3）购自美国Cerilliant公司[（100.0±0.5）μg/mL]；甲酸（质谱纯）、正已烷（质谱纯）、乙酸乙酯（质谱纯）、乙腈（质谱纯）均购自美国ThermoFisher Scientific公司。……