陈 雪，王 莺，康 晶，赖增妍，郑连文 , 赵东海

(1.吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林 132013；2.吉林医药学院临床医学院，吉林 吉林 132013；3.吉林大学第二医院，吉林 长春 130041)

因生活习惯改变，如久坐、缺乏运动等，会使男性睾丸处于高温环境中，进而导致氧化应激损伤发生。有报道称，小鼠在热应激损伤后，不仅睾丸组织受到损害，而且精子质量也会发生异常，导致生殖功能低下[1]。

毛蕊花糖苷是中药肉苁蓉的有效成分[2]。有研究表明，毛蕊花糖苷可改善小鼠睾丸萎缩和雄激素减少，减少勃起潜伏期和增加精子数量[3]。目前，有关毛蕊花糖苷在雄性生殖功能改善的研究尚不深入，相关的作用机理仍不清晰。本试验通过制备热应激损伤睾丸间质细胞(TM3)模型，观察毛蕊花糖苷对TM3热应激损伤的保护作用和机制，从而为毛蕊花糖苷在雄性生殖损伤保护中的开发和应用提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 F12培养液、胎牛血清、青霉素、链霉素，美国Sigma 公司；总蛋白裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒，碧云天生物科技有限公司；兔抗人Bax多克隆抗体、兔抗人Bcl-2多克隆抗体、兔抗人Cleaved-caspase 3多克隆抗体,美国Cell Signal公司；Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒，江苏凯基生物公司。

1.2 主要仪器 倒置光学显微镜(奥林巴斯)；高速低温离心机(德国Ependoff公司)；电泳仪、电转移仪、垂直电泳槽(美国BioRad 公司)；CO2培养箱、旋涡震荡仪(美国Thermo公司)。

1.3 试验对象 细胞株TM3，购自中国科学院细胞库。

1.4 试验方法

1.4.1 试验设计 TM3用含1%双抗、10%胎牛血清的F12培养液培养，置于5% CO2、饱和湿度、37 ℃ 培养箱中。……