高鑫鑫，王艳文，郭 晶，赵聪慧，王文婷，刘文强，李旭勇

(聊城大学农学院，山东 聊城 252000)

A型流感病毒是一种RNA病毒，根据病毒表面的血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuramidinase，NA)分为不同的亚型(H1～H18和N1～N11)。除了在蝙蝠中分离的H17N10和H18N11亚型流感病毒[1-2]，在禽类可检测到所有亚型流感病毒(H1～H16和N1～N9)。流感病毒不仅能感染鸡、鸭等禽类，还能够感染人。H1N1、H2N2和H3N2亚型流感病毒可在人类传播，在历史上引起了数次大流行[3]。H5N1、H5N6、H7N9和H9N2等亚型禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)能够直接从动物感染人类，表明这些亚型的病毒可能具有通过进一步进化而成为引起新的大流行病的潜在威胁[4-6]。1966年，首次在家禽中发现H9N2亚型流感病毒[7]。研究表明，H9N2 AIV能够为感染人类的H5N1、H5N6、H7N9 和H10N8等亚型AIV提供内部基因[8-12]。同时，本课题组前期研究发现，H9N2同H4N6 AIV共感染家禽后在宿主体内会发生高频率的基因重组，并产生比野生型病毒具有更高毒力的子代重组病毒[13]。

为更深入了解H9N2 AIV遗传演化规律，本试验于2017—2019年在活禽市场采集样品，分离选取3株 H9N2 AIV进行全基因组序列测定、遗传进化及关键氨基酸位点分析，总结了数据库中历年H9N2分离株HA基因关键氨基酸位点的变异规律，为进一步了解H9N2 AIV的进化、变异规律提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 病毒及鸡胚 试验中所用的3株H9N2分离株A/chicken/Weifang/862/2017(简称CK/862/17)来源于潍坊某养殖场病鸡组织、毒株A/chicken/Liaocheng/844/2018(简称CK/844/18)和毒株A/pigeon/Liaocheng/168/2019(简称PG/168/19)均来源于山东省农贸市场，由本实验室分离鉴定并保存。其中CK/862/17和CK/844/18宿主为鸡，PG/168/19来源于鸽子。SPF鸡胚，购自济南斯派福瑞禽业科技有限公司。

1.2 试剂 RNA提取试剂盒(TIANamp Virus RNA Kit,DP315-R)，购自北京天根生化科技有限公司；……