高 歌 查 旭 刘伟进 杨 慧

(首都医科大学基础医学院神经生物系 北京脑重大疾病研究院帕金森病研究所 北京市神经再生修复重点实验室 神经变性病教育部重点实验室, 北京 100069)

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的神经退行性疾病，临床上常表现为肌僵直，运动迟缓，静止性震颤，姿势步态异常等。PD的典型病理特征为中脑黑质致密部多巴胺能神经元进行性丢失和残存神经元内出现路易氏体 (Lewy bodies，LBs) 。LBs的主要成分是α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)，其中90%的为129位丝氨酸磷酸化的α-syn(phosphorylated α-syn monomer,p-α-syn)。研究[1]显示，PD患者血浆和脑脊液中129位丝氨酸磷酸化的α-syn与对照组相比显著增加， p-α-syn可以作为PD诊断的潜在生物标志物，并且也可以作为PD进程的指标之一[2]。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是目前分析α-syn在血浆和脑脊液中的主要方法[3]，但是，由于其在血浆中含量低，检测方法不统一，使α-syn的检测出现不一致甚至是矛盾的结果[4-5]，迫切需要更稳定和灵敏的检测方法。解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation-enhanced lanthanide fluorescent immunoassay, DELFIA)于1983年被首次报道[6]，DELFIA通常使用铕(Eu3+)螯合物标记的抗体作为分子探针，能通过时间分辨荧光降低非特异性信号，在检测灵敏度、检测线性范围和检测稳定性方面具有明显的优势，目前未见到其应用到检测血浆p-α-syn中。因此，本研究构建了DELIFA检测p-α-syn的双抗夹心法检测体系，其中包括制备和验证各种标准抗原，验证捕获抗体及检测抗体等，探究本实验室制备的抗体对在DELFIA方法中对p-α-syn是否有更高的特异度和灵敏度，并在Thy1-α-SYN转基因小鼠的血浆中进行了初步应用，以期为PD的诊断提供一种更灵敏可靠的检测方法。……