潘彩霞

（中国刑事警察学院警犬技术学院，辽宁沈阳 110000）

犬精液冷冻保存技术是将经过处理的犬精液长期保存在-196℃液氮中。将冷冻精液解冻后，通过人工授精可以实现以一配多、隔世代的育种等目的。为提高冷冻-解冻后的精液品质，大量研究围绕冷冻稀释液的成分[1-2]、冷冻程序[3]、解冻程序等展开，但对解冻后和使用前孵育阶段的研究甚少。精液经历冷冻损伤后比鲜精脆弱很多，不当的孵育条件可能会给解冻后的精液造成进一步损害，降低受精率。Ström 等[4]将解冻后的精液按1:1添加解冻稀释液，并在37℃水浴温度下继续孵育直至使用；Peña 等[5]按1:4 添加解冻稀释液，多数研究未提及解冻后的孵育温度[6-7]。本研究旨在比较解冻后解冻稀释液的不同添加比例对精液品质的影响，并比较不同温度下孵育30 min 和2 h 后精液品质的差异，进而筛选出最佳的孵育条件。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂 实验选择相貌体型好、3～5 岁、有过配种经验的5 条优秀德国牧羊犬种公犬，由公安部沈阳警犬基地提供。采精前后保证其正常日粮供应及饮水。Tris、柠檬酸、葡萄糖等试剂均为生工生物工程（上海）股份有限公司产品。

1.2 采精及精液品质检测 采用手握按摩法对德国牧羊犬进行精液采集。先用酒精浸泡的湿毛巾擦拭公犬外阴部，手握住公犬外阴进行前后按摩，当公犬阴茎勃起时，采精人员一手抓住龟头球状部位，一手拿着漏斗离心管相连的容器收集富含精子段精液。注意采集精液时要避免器具接触犬龟头，否则会造成犬应激，导致射精停止。……