牛小黄体细胞与颗粒细胞表达差异基因的筛选及分析
2021-11-09孟金柱安清明吴震洋赵园园
孟金柱,安清明,吴震洋,赵园园
(铜仁学院贵州省梵净山地区生物多样性保护与利用重点实验室,贵州铜仁 554300)
雌性动物的卵泡在胎儿发育过程中就已经形成,最初由卵母细胞组成,在减数分裂中停止,逐步被多层上皮颗粒细胞(GCs)包围[1]。卵泡膜在基底层外发育,内膜由毛细血管、成纤维细胞、免疫细胞和类固醇生成细胞组成[2],其中类固醇生成细胞负责分泌雄激素和胰岛素样因子3(INSL3),这个过程会持续到排卵[3]。GCs 只有在排卵前才发育成熟为类固醇生成细胞,将卵泡膜细胞(TCs)分泌的雄激素转化为雌激素[4]。随着卵泡液中雌激素浓度持续升高,促黄体素(LH)峰出现,诱发卵泡排卵。排卵后,卵巢上的TCs 和GCs 分别增殖分化形成小黄体细胞(SLCs)和大黄体细胞(LLCs),SLCs 中含有大量促黄体素受体(LHR),抑制黄体LH 的分泌,从而抑制排卵;而LLCs 则表达大量的前列腺素F2α受体(PTGFR),使黄体溶解,从而引起排卵发生[5-6]。
目前,人们对包括牛、羊及人类在内的多种动物卵泡中GCs 和TCs 的生理作用进行了研究,物种之间虽然存在差异,但在卵巢生理学方面大部分是保守的[7]。Christenson 等[8]报道了牛GCs 和TCs 在LH 和前列腺素峰发生时的短期变化,但是从卵泡到黄体的转变也没有得到解决。本研究通过筛选GEO 数据库GSE83524 RNA-seq 表达谱中SLCs 和GCs 之间的差异表达基因,应用生物信息学分析结合qRT-PCR 验证,为支持现有的黄体细胞分型及扩展这些细胞在卵巢生理中的功能作用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及样品采集 选取18 月龄健康的思南黄牛(母牛),屠宰后分别收集双侧卵巢上的最大卵泡(卵巢囊肿除外),参考文献方法[9]来筛选优势卵泡并分离GCs,参考文献方法[10]分离SLCs。……
